Phanerochaete chrysosporium: genetic mapping, heterologous expression and transcription pattern of cellulase genes

O fungo Phanerochaete chrysosporium é conhecido por sua capacidade de degradar lignina e celulose. Entretanto, não se tem muito conhecimento a respeito da genética deste fungo, bem como da expressão de seus genes codificando para celulases, o que possibilitaria a construção de 1 linhagens as quais podem ser empregadas em bioprocessos como delignificaçao e sacarificação da celulose. Neste trabalho, 13 novos genes foram mapeados. Foi determinada a ligação entre cbh1-5 e aad (3,38 unidades mapa). O resultado do mapeamento genético associado ao mapeamento físico pela separação de cromossomos e hibridização, possibilitará a ampliação do mapa já existente. Seis genes distintos codificando para celobiohidrolase 1 (CBH 1) foram isolados e caracterizados em P. chrysopsporium, mas seus produtos enzimáticos não são conhecidos. Também neste trabalho, o gene cbh1-1 foi expresso em levedura. Entretanto, nenhuma atividade enzimática pôde ser detectada para este gene, bem como para o controle positivo cbh1-4.O padrão de transcrição de seis genes codificando para CBH I, um para CBH II e um para CDH foi determinado quando P. chrysosporium foi cultivado em lascas de madeira. Este padrão de transcrição difere do previamente descrito, quando este fungo está crescendo em meio de cultura definido, suplementado com celulose. Isto sugere que a transcrição de diferentes cbhs é regulada de acordo com o substrato presente no meio de cultura.The white-rot fungus Phanerochaete chrysosporium is well known for its ability to degrade lignin-cellulose substrate. However, not much is known about its genetics and cellulase gene expressíon, that would allow the construction of strains whích can be employed in bioprocess such as biopulping and cellulose saccharification. This work presents the genetic mapping results for 13 new genes. These results when associated with physic mapping by chromosome separation and hybridization will amplify the already existing genetic map. A significant linkage was determined between cbh1-5 and aad (3,38 map units). Six genes coding for cellobiohydrolase I(CBH 1) were isolated, nevertheless their enzymatic product are not known. This work also presents the attempt to express cbh1-1 in Saccharomyces cerevisiae. However, no enzymatic activity was observed for this gene, as well as for the positive control cbh1-4. The transcription pattern of six genes coding for CBH I, one for CBH II and one for CDH was determined when P. chrysosporium is growing on wood chips. The transcription pattern found here is different from the previously determined when this sarne fungus is growing on defined media supplemented with cellulose. This finding suggests that differential cbhs transcription is depending upon the substrate typ