Extraction and determination of trypsin enzyme from visceral organs of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) and characteristic's optimizations for obtained trypsin

Bu araştırma, Alabalık (Oncorhynchus mykiss) 'in iç organlarından elde edilecek olan proteinaz tripsin enziminin geri kazanılması ve çıkarılması, karakterize etmeyi ve bir takım fonksiyonel özelliklerinin belirlenmesini amaçlamıştır. Ekstre edilen tripsin aktivitesi için optimum sıcaklık 45 °C olarak belirlenmiştir. Enzim (20–60 °C) sıcaklık aralıklarında aktif olmuştur, ve 60 °C'de başlangıç aktivitesinin %85–90 'ı korunmuştur. 80 °C'de enzim aktivitesinin %85 'ini kaybetmiştir. Alabalık tripsinin optimal pH değeri 8 olarak belirlenmişitr, başlangıç etkinliğinin %90 'ı korunmuştur. Enzim, nötr ve alkali pH aralıkları arasında stabil kalmıştır. %75–85 nispi aktivite korunmakta ve maksimum aktivite pH 7–8 arasında gözlenmiştir. Enzim, başlangıç aktivitesinin %80 'ini muhafaza ederek, 6.0–11.0 arasında geniş bir pH aralığında kararlı olmuştur. Ancak 55 °C'nin üzerindeki sıcaklıklarda kararsız kalmıştır, enzim 55 °C'den yüksek sıcaklıklarda aktivitesini kademeli bir şekilde kaybetmiştir. Proteolitik aktivite, bazı tripsin inhibitörleri tarafından güçlü bir şekilde önlenmiştir. Benzamidin HCl varlığında, tripsin nispi aktivitesinin %38 'ini kaybetmektedir. Fenilsimetilsülfonil florür (PMSF), tripsin aktivitesini %67 düşürürken, Etilendiamintetraasetik asit (EDTA) varlığında, tripsin aktivitesinin %81'i kaybolmuştur. Hem EDTA hem de PMSF'nün, tripsin aktivitesi üzerinde önemli inhibe edici etkiye sahip olduğu gözlenmiştir. Enzim aktivitesi, artan NaCl konsantrasyonu ile sürekli olarak azalmıştır. %0 NaCl 'de, tripsinlerin nispi aktivitesi %100 iken, %1 NaCl 'de 53.31 aktivite gözlenmiştir. %3, 5, 7.5, 10, 12.5 ve 15 NaCl aralıklarında, tripsin sırasıyla 47.55, 43.52, 40.98, 37.82, 44.33 ve 37.16 nispi aktiviteye sahip olmuştur. 40 °C'de CaC, tripsin enzimi üzerinde aktivatör etkisi olduğunu gözlenmiştir. Alabalık tripsinin moleküler ağırlığı SDS-PAGE Elektroforezine göre 25 kDa olarak belirlenmiştir.This investigation aimed to extract, characterize and to study the effect of some parameters on trypsin proteinase recovery from visceral organs of Rainbow Trout (Oncorhynchus mykiss). Optimal temperature for the activity of extracted Trypsin was determined as 45 °C. Enzyme was active at temperature ranges of (20–60 °C), where maintained 85–90% of initial activity at 60 °C. At 80 °C enzyme lost 85% of its activity. The optimal pH for the trout trypsin determined to be 8, where 90% of activity was retained. Enzyme was stable between neutral and alkaline pH ranges in which 75–85% of relative activity maintained and maximum activity observed between pH 7–8. The enzyme was stable in a wide pH ranges of 6.0–11.0 maintaining 80% of its initial activity. But unstable at the temperatures greater than 55 °C, where enzyme gradually lost its activity at temperatures greater than 55 °C. The proteolytic activity was strongly inhibited by some trypsin inhibitors. In the presence of Benzamidine HCl, trypsin lost 38% of its relative activity. While Phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) decreased activity by 67%, and at the existence of Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), 81% of trypsin activity was lost. Both EDTA and PMSF were observed to have significant inhibiting impact on trypsin activity. Enzyme activity continuously decreased with increasing NaCl concentration. While at 0% NaCl, relative activity of trypsin was 100%, at 1% NaCl 53.31 activity was observed. Trypsin at %3, 5, 7.5, 10, 12.5, and 15 NaCl ranges, showed 47.55, 43.52, 40.98, 37.82, 44.33 and 37.16 relative activity respectively. At 40 °C, CaC performed as an activator on trypsin enzyme. The molecular weight of trout trypsin was determined to be 25 kDa based on SDS-PAGE Electrophoresis