Efecto de la criopreservación en la integridad acrosomal de espermatozoides viables de alpaca evaluada mediante citometría de flujo

The aim of this study was to determine the effect of cryopreservation on acrosomal integrity in viable alpaca sperm. Samples from 46 alpaca testicles that had motility >30% and sperm concentration >50x106 sperm/ml were processed. Sperm recovered from the tail of the epididymis were separated into two 500 µl aliquots. The first aliquot was for the initial fresh evaluation and the second aliquot was frozen in straws and stored in liquid nitrogen until the evaluation of acrosomal integrity. For the evaluation of viability and acrosomal integrity, 100 µl of each sample were incubated with 2.5 µl of FITC-PSA (100 µg/ml) and 0.5 µl of propidium iodide (PI, 2.4 mM) for 10 min at 38 °C. Immediately afterwards, the samples were evaluated by flow cytometry, acquiring 10 000 events compatible with sperm per sample. FITC-PSA and PI were excited with a 488 nm laser, and fluorescence emission was detected using channels Ch02 (505-560 nm) for FITC-PSA and Ch05 (642-740 nm) for PI. The percentage of sperm with acrosomal integrity (FITC-PSA negative) of the population of viable sperm (PI negative) was determined. Wilcoxon's signed rank test was used to determine how cryopreservation affects acrosomal integrity in viable sperm. The acrosomal integrity of fresh viable spermatozoa (98.25 ± 5.41%) was found to be similar to that of viable post-thaw spermatozoa (98.75 ± 2.17%). It is concluded that viable alpaca sperm before and after the cryopreservation process maintain a high percentage of acrosomal integrity.El objetivo del presente estudio fue determinar el efecto de la criopreservación sobre la integridad acrosomal en espermatozoides viables de alpaca. Se procesaron muestras de 46 testículos de alpaca que presentaron una motilidad >30% y concentración espermática >50x106 espermatozoides/ml. Los espermatozoides recuperados de la cola del epidídimo se separaron en dos alícuotas de 500 µl. La primera alícuota fue para la evaluación inicial en fresco y la segunda alícuota se congeló en pajillas que fueron almacenadas en nitrógeno líquido hasta el día de su evaluación. Para la evaluación de viabilidad e integridad acrosomal, 100 µl de cada muestra fueron incubadas con 2.5 µl de FITC-PSA (100 µg/ml) y 0.5 µl de ioduro de propidio (PI, 2.4 mM) por 10 min a 38 °C. Inmediatamente después, las muestras se evaluaron por citometría de flujo, adquiriéndose diez mil eventos compatibles con espermatozoides por muestra. FITC-PSA y PI fueron excitados con un láser de 488 nm, y la emisión de fluorescencia fue detectada utilizando los canales Ch02 (505-560 nm) para FITC-PSA y Ch05 (642-740nm) para PI. Se determinó el porcentaje de espermatozoides con integridad acrosomal (FITC-PSA negativos) de la población de espermatozoides viables (PI negativos). Se utilizó la prueba de los rangos con signos de Wilcoxon para determinar como la criopreservación afecta la integridad acrosomal en los espermatozoides viables. Se encontró que la integridad acrosomal de los espermatozoides viables frescos (98.25 ± 5.41%) fue similar a la de los espermatozoides viables pos-descongelamiento (98.75 ± 2.17%). Se concluye que los espermatozoides viables de alpaca antes y después del proceso de criopreservación mantienen un elevado porcentaje de integridad acrosomal