Estudo dos efeitos do metotrexato sobre alguns parâmetros metabólicos em células HeLa e em fígado perfundido

Orientadora: Dra. Maria Lúcia Wambier KlüppelTese (Doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Curso de Pós-Graduação em BioquímicaInclui referências: p. 89-107Resumo: Em concentrações de 0,4mM o metotrexato promove um aumento discreto do consumo de oxigênio em fígado perfundido de rato alimentado e em jejum; a esta concentração a gIicogenoIise é aumentada em 100% e em concentração de 0,8mM, o aumento e de 350% sendo o efeito reversível. Observa-se ainda acumulo de piruvato (250%) e diminuição da relação NAD+/NADH (60%). A droga não afeta a gIiconeogenese, e quando se usa homogenato de fígado de rato, não se observa efeito sobre a glicogênio fosforilase e glucose-6-fosfatase. A droga (0,4mM) atua sobre células HeLa inibindo a atividade de ferricianeto redutase transmembrana plasmática (90%), o efluxo de prótons transmembrana plasmática (70%) e a respiração celular (10%) mantida por substratos endógenos, sendo este último efeito observado apenas apos pré-incubação de dez minutos. Em presença de glucose como substrato, o metotrexato estimulou o consumo de oxigênio, reduziu a produção de lactato (25%) e duplicou a produção de piruvato; houve acumulo dos metabolitos intermediários PEP, GAP, DAP; por outro lado, o consumo de glucose e os níveis de G6P e F6P não foram afetados, havendo discreta diminuição (13%) dos níveis de F-1,6- P2 - Em extrato livre de células HeLa, o MTX em todas as concentrações usadas inibe a atividade da lactato desidrogenase, sendo aparentemente uma inibição do tipo incompetitvo. Note-se que em concentração de até 4,6 x 10-4M o MTX estimula a atividade da gIiceraldeído-3-fosfato desidrogenase inibindo-a em concentrações superiores; efeito semelhante ocorre com a glucose-6-fosfato desidrogenase, sendo inibida a concentrações superiores a 2 x 10-4M . A piruvato quinase, não e afetada diretamente pela droga. 0s resultados sugerem que o metotrexato apresenta mais de um sítio de ação na via glicolítica e que a inibição da atividade redox transmembrana plasmática esta integrada ao contexto metabólico sendo anterior aquele da dihidrofolato redutase