Avaliação do potencial citotóxico, antiproliferativo e anti-metastático in vitro de Lafoensia pacari A. St-Hil. em células de câncer colorretal

Orientador: Prof. Dr. Wesley Maurício de SouzaCoorientadoras: Profa Dra. Karina Bettega Felipe, Profa Dra. Amanda Rabello CrismaDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa : Curitiba, 28/02/2020Inclui referências: p. 78-90Área de concentração: Análises ClínicasResumo: A Lafoensia pacari tem sido popularmente utilizada para o tratamento do câncer e de doenças inflamatórias. Estudos demonstram que o extrato metanólico da planta é capaz de induzir a apoptose em células de câncer colorretal (HRT-18), entretanto, os mecanismos envolvidos na mediação deste efeito, bem como a capacidade desta espécie vegetal em interferir na angiogênese e na metástase, ainda não foram elucidados. Desta forma, este trabalho tem por objetivo avaliar o efeito citotóxico, antiproliferativo e anti-metastático in vitro de extratos de L. pacari em células HRT-18, bem como verificar se tais efeitos estão associados à modulação da via do óxido nítrico (ON). O efeito citotóxico/antiproliferativo de 19 extratos da casca do caule de L. pacari produzidos a partir dos solventes água, metanol, etanol, acetona e combinações entre os mesmos, foi avaliado pela redução da resazurina em células HRT-18 e McCoy. De maneira geral, todos os extratos testados exerceram citotoxicidade significativa em células HRT-18, destacando-se o extrato E-14, que apresentou maior seletividade, sendo seu efeito confirmado pelo ensaio clonogênico e fragmentação do DNA. O ensaio de wound healing mostrou que E-14 foi capaz de inibir a migração de células HRT-18 na concentração de 16 ?g/mL em torno de 61%. Além disso, observou-se que E-14 reduziu em torno de 73% o potencial invasivo de células HRT-18 na concentração de 16 ?g/mL após 48 h de tratamento. Por meio da reação de Griess foi possível verificar que o tratamento com E-14 reduziu significativamente a produção de ON na linhagem tumoral. Adicionalmente, o ensaio de zimografia demonstrou que o E-14 foi capaz de bloquear a atividade das formas latentes de MMP-9 e reduziu significativamente (86%) a atividade de MMP-9 ativa. Os resultados sugerem que E-14 exerce efeito citotóxico e antimetastático significativo através da via de inibição do ON. Palavras chave: Lafoensia pacari, citotoxicidade, óxido nítrico, anti-metastático.Abstract: Lafoensia pacari has been popularly used for the treatment of various types of cancer and inflammatory diseases. Studies demonstrate that the methanolic extract of plant is capable of inducing in colorectal cancer cells (HRT-18), however, the mechanisms involved in mediating this effect, as well as the ability of this plant species to interfere in angiogenesis and metastasis, have not yet been elucidated.Thus, this work aims to evaluate the cytotoxic, antiproliferative and anti-metastatic effect in vitro of L.pacari extracts in HRT-18 cells, as well as to verify if these effects are associated with the modulation of the nitric oxide (NO) pathway. The cytotoxic/antiproliferative effect of 19 L. pacari stem bark extracts produced from the solvents water, methanol, ethanol, acetone and combinations between them was evaluated by the reduction of resazurin in HRT-18 and McCoy cells. In general, all the tested extracts exerted significant cytotoxicity in HRT-18 cells, especially the E-14 extract, which showed greater selectivity and its effect was confirmed by the clonogenic and DNA fragmentation assay. The wound healing assay showed that E-14 was able to inhibit the migration of HRT-18 cells at a concentration of 16 ug/mL around 61%. In addition, the transwell cell invasion assay demonstrated that E-14 was able to reduce the invasive ability of HRT-18 cells by 73% at a concentration of 16 ug/mL after 48 h of treatment. Through the Griess reaction it was possible to verify that the treatment with E-14 significantly reduced the production of NO in the tumor lineage. The zymography assay showed that E-14 was able to block the activity of latent forms of MMP-9 and significantly reduced (86%) the activity of active MMP-9. The results suggest that E-14 exerts a significant cytotoxic and anti-metastatic effect through the NO inhibition pathway. Key words: Lafoensia pacari, cytotoxicity, nitric oxide, anti-metastatic