Substance P quantification in the sural nerve of hypertensive rats

A hipertensão arterial sistêmica é uma doença altamente incidente e fator de risco, principalmente, para acidentes vasculares cerebrais. No entanto, é raramente explorada como possível causa de neuropatia para fibras mielínicas finas e amielínicas. A biópsia do nervo periférico é um recurso importante no diagnóstico de neuropatias, sendo inclusão em resina epóxi padrão-ouro de identificação e quantificação de fibras nervosas. No entanto, a imunomarcação vem sendo adicionada à investigação de neuropatias inflamatórias. Porém, anticorpos contra neurotransmissores para identificação de fibras específicas são muito pouco explorados. Assim, o objetivo deste estudo foi identificar substância P (SP), através de imunohistoquímica (IHQ), e quantificar a densidade de fibras mielínicas finas e amielínicas reativas a este neurotransmissor nos segmentos proximais e distais dos nervos surais de ratos espontaneamente hipertensos (SHR) e normotensos (WKY), machos e fêmeas (n=6 por grupo) com 20 semanas de idade, comparando os diferentes segmentos e lados deste nervo. Após anestesia e medida direta da pressão arterial, os nervos foram dissecados e preparados tecnicamente para IHQ, a qual seguiu protocolo padronizado. A quantificação da densidade de fibras reativas à SP presente nos nervos foi realizada através do programa computacional Image J. Para dados pareados com distribuição normal realizou-se teste t de Student pareado, em caso contrário foi executado o teste de Wilcoxon, e para dados não pareados com distribuição normal realizou-se teste t de Student, em caso contrário, o teste de Mann-Whitney. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos quando p<0,05. Diferenças significativas foram observadas para o parâmetro proposto quando comparadas as fêmeas WKY com as SHR e quando comparados os machos WKY com os SHR. Os resultados indicaram que a hipertensão arterial sistêmica altera importantes componentes do nervo Sural de animais hipertensos. Além disso, as comparações entre machos e fêmeas WKY e SHR permitiram concluir também que a densidade das fibras imunomarcadas neste nervo não possui correlação com gênero, mas sim com linhagem.Systemic arterial hypertension is a highly incident disease and a major risk factor for stroke. However, it is rarely explored as a possible cause of neuropathy for thin myelinic fibers and amyelinic fibers. Peripheral nerve biopsy is an important resource in the diagnosis of neuropathies, being embedding in epoxy resin the gold standard for identification and quantification of nerve fibers. However, immunostaining has been added to the investigation of inflammatory neuropathies. However, antibodies against neurotransmitters for identifying specific fibers are very little explored. Thus, the objective of this work was to identify substance P (SP) by immunohistochemistry (IHC), and to quantify the density of SP-reactives thin myelin fibers and unmyelinated fibers in the proximal and distal segments of the nerves in the spontaneous hypertensive rat (SHR) and normotensive (WKY), males and females (n = 6 per group) at 20 weeks of age, comparing the different segments and sides of this nerve. After anesthesia and direct blood pressure measurement, the nerves were dissected and technically prepared for IHC, which followed a standardized protocol. The quantification of the density of SP-reactive fibers present in the nerves was performed using the computer program Image J. For paired data with normal distribution, Student\'s t-test was performed, otherwise the Wilcoxon test was performed, and for unpaired data with normal distribution, Student\'s t-test was performed, otherwise Mann-Whitney test was executed. Results were considered statistically significant when p