Atividade anti-inflamatória do extrato aquoso das folhas da Annona crassiflora (araticum) DC em modelos experimentais in vivo e in vitro

The Brazilian Cerrado has numerous species of popular use, including Annona crassiflora (AC) from the Annonaceae family. Bioactive compounds such as flavonoids, tannins and alkaloids were identified in extracts of leaves, seeds, bark and fruits of A. crassiflora, which have been associated with bactericidal, antimalarial, larvicidal, nematicidal, anti-Leishmanial, analgesic and anti-inflammatory activities. However, there are no studies in the literature that evaluated the anti-inflammatory potential of the aqueous extract of the leaves of this species. Thus, the present study aimed to investigate the possible anti-inflammatory effects of the freeze-dried aqueous extract of A. crassiflora leaves (EAAC) using in vivo and in vitro experimental models, of peritoneal inflammation induced by carrageenan (CGN) and quantification the production of nitric oxide (NO) in culture supernatants of RAW 264.7 cells, respectively. In the in vivo experimental model, BALB/c mice were divided into four groups (G 1 - 4) and treated orally (p.o.) with: G1 = 0.5% carboxymethyl cellulose (CBX); G3 = EAAC 30 mg / kg; G4 = EAAC 55 mg / kg; G5 = EAAC 100 mg / kg. After sixty minutes, the animals received an intraperitoneal (i.p.) injection of 1% CGN to induce peritoneal inflammation. Four hours after the CGN injection, the animals were anesthetized and killed by cervical dislocation. Then, an incision was made in the abdomen and the peritoneal cavity was gently washed with phosphate buffered saline (PBS), pH 7.2, and the peritoneal lavage was collected for total and differential leukocyte counts. The results obtained showed that EAAC, at a dose of 30 mg / kg, significantly reduced the migration of total leukocytes to the peritoneal cavity, compared to the control group treated only with the 0.5% CBX vehicle. In addition, at this dose, there was a reduction in the population of mononuclear cells (monocytes / macrophages), but not of neutrophils and lymphocytes, as observed in the differential count. In the highest doses (55 and 100 mg / kg), EAAC reduced the populations of neutrophils and monocytes / macrophages, although it did not decrease the total leukocyte migration, in relation to the control group. Considering that EAAC (30 mg / kg) reduced the number of monocytes / macrophages in the peritoneal inflammatory response induced by CGN 1%, we investigated its effect on the production of nitric oxide (NO) in RAW 264.7 cells. RAW 264.7 cells were treated with RPMI medium only (control) or with different concentrations of EAAC (0.488 to 1000.0 μg / mL) for 24 hours, and then NO production was quantified in culture supernatants using the method of Griess. The results obtained suggest that the extract, in its highest concentrations (62 to 1000 μg / mL), tends to induce NO production in a dose-dependent manner, as demonstrated by the greater amount of NO determined in supernatants of the cultures of RAW 264.7 cells, although there were no statistically significant differences in relation to the control group. The results obtained suggest that the EAAC has dose-dependent anti- or pro-inflammatory properties, thus presenting a dual effect on the modulation of inflammatory responses.CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoTrabalho de Conclusão de Curso (Graduação)O Cerrado brasileiro apresenta inúmeras espécies de uso popular, incluindo a Annona crassiflora (AC) da família Annonaceae. Compostos bioativos, tais como flavonoides, taninos e alcaloides foram identificados em extratos das folhas, sementes, casca e frutos da A. crassiflora, os quais foram associados às atividades bactericida, antimalárica, larvicida, nematicida, anti-Leishmania, analgésica e anti-inflamatória. Contudo, não há na literatura estudos que avaliaram o potencial anti-inflamatório do extrato aquoso das folhas da referida espécie. Desse modo, o presente estudo teve como objetivo geral investigar os possíveis efeitos anti-inflamatórios do extrato aquoso liofilizado das folhas da A. crassiflora (EAAC) utilizando modelos experimentais in vivo e in vitro, de inflamação peritoneal induzida por carragenina (CGN) e quantificação da produção de óxido nítrico (NO) em sobrenadantes de cultura de células RAW 264.7, respectivamente. No modelo experimental in vivo, camundongos BALB/c foram divididos em quatro grupos (G 1 – 4) e tratados por via oral (v.o.) com: G1=carboximetilcelulose (CBX) 0,5%; G3=EAAC 30 mg/Kg; G4=EAAC 55 mg/Kg; G5=EAAC 100 mg/Kg. Após sessenta minutos, os animais receberam injeção intraperitoneal (i.p.) de CGN 1% para indução da inflamação peritoneal. Quatro horas após a injeção de CGN, os animais foram anestesiados e mortos por deslocamento cervical. Em seguida, foi feita uma incisão no abdômen e a cavidade peritoneal foi gentilmente lavada com solução salina tamponada com fosfato (PBS), pH 7,2, e o lavado peritoneal foi coletado para as contagens total e diferencial de leucócitos. Os resultados obtidos demonstraram que o EAAC, na dose de 30 mg/Kg, reduziu significativamente a migração de leucócitos totais para a cavidade peritoneal, comparado ao grupo controle tratado apenas com o veículo CBX 0,5%. Além disto, nessa dose, houve redução da população de mononucleares (monócitos/macrófagos), mas não de neutrófilos e linfócitos, como observado na contagem diferencial. Nas maiores doses (55 e 100 mg/Kg), o EAAC reduziu as populações de neutrófilos e monócitos/macrófagos, embora não tenha diminuído a migração leucocitária total, em relação ao grupo controle. Considerando que o EAAC (30 mg/Kg) reduziu o número de monócitos/macrófagos na resposta inflamatória peritoneal induzida por CGN 1%, investigamos o seu efeito sobre a produção de óxido nítrico (NO) em células RAW 264.7. Células RAW 264.7 foram tratadas com meio RPMI somente (controle) ou com diferentes concentrações do EAAC (0,488 a 1000,0 μg/mL) por 24 horas e, em seguida, a produção de NO foi quantificada nos sobrenadantes de cultura por meio do método de Griess. Os resultados obtidos sugerem que o extrato, nas maiores concentrações (62 a 1000 μg/mL), tende a induzir a produção de NO de modo dose-dependente, como demonstrado pela maior quantidade de NO determinada em sobrenadantes das culturas de células RAW 264.7, embora não foram observadas diferenças estatisticamente significantes em relação ao grupo controle. Os resultados obtidos sugerem que o EAAC possui propriedades anti- ou pró- inflamatórias dose-dependentes, apresentando, portanto, um efeito dual na modulação de respostas inflamatórias