Efecto de la Cotinina y Aceite de Krill sobre el tejido neuroglial, actividad neurocognitiva y comportamiento, en ratones C57BL/6 expuestos a estrés.

Programa de Doctorado en Ciencias de la Actividad Física y del DeporteLínea de Investigación: Actividad Física, Salud y Calidad de VidaClave Programa: DAFCódigo Línea: 33La exposición a diversas formas de estrés intenso o crónico, induce importantes alteraciones neuroquímicas, morfológicas y funcionales en el tejido cerebral, lo que genera finalmente, en el individuo, déficits cognitivos y un comportamiento depresivo. Estas alteraciones están asociadas a procesos neuroinflamatorios y neurodegenerativos, que afectan tanto a neuronas como al tejido glial. Es crucial destacar las distintas capacidades funcionales de las células astrocíticas, en especial en regiones claves para el aprendizaje, memoria y respuestas emocionales, como el hipocampo y la corteza prefrontal. También es importante comprender cómo la disfunción astrocítica, está relacionada a la pérdida de memoria, trastorno depresivo mayor y otras condiciones neuropsiquiátricas. Considerando como base lo anterior, se estableció el siguiente objetivo general para el desarrollo de esta tesis: ¿ Determinar los efectos que produce la suplementación con cotinina y/o aceite de Krill, como cotratamiento o post tratamiento, sobre el tejido neuroglial, comportamiento, estado anímico y la memoria, en ratones C57BL/6, expuestos a estrés. Materiales y métodos a) Animales: Se utilizaron ratones (cepa C57BL/6) facilitados por la Universidad de Chile. Mantenidos en un ambiente controlado (ciclo 12h:12h luz/oscuridad, temperatura de 22°C.) y acceso libre a alimento y agua (ad libitum). El manejo y cuidado de los animales se realizó de acuerdo a la ¿Guide for the care and use of Laboratory Animals¿ del National Institute of Health (USA). b) Drogas y reactivos: cotinina ((5S)-methyl-5-(3-pyridyl)-pyrrolidin-2-one) fue obtenido de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Aceite de krill obtenido de softgels capsules of krill oil omega-3 of Walgreens (Superba, USA). Las cápsulas contienen 300 mg de aceite de krill (90 mg de ácidos grasos omega-3, 50 mg EPA, 24 mg DHA, 130 mg de fosfolípidos). El fabricante no provee información sobre el contenido de astaxantina. c) Administración de drogas: se utilizó vía intranasal (IN) y gavage (oral), según cada protocolo. d) Metodología: en general se utilizaron dos métodos de estrés (restricción de la movilidad y condicionamiento de miedo contextual). Los animales se agruparon para estudiar los efectos pre y post estrés, cotratamiento o post tratamiento con las respectivas drogas versus vehículo (solución salina), según cada estudio. Diseño experimental específico, descrito en cada publicación, según los objetivos propuestos. e) Estudios de comportamiento: test para actividad locomotora o de campo abierto (OF); test para memoria de trabajo o reconocimiento de objeto nuevo (NOR); test para evaluar comportamiento depresivo o test de nado forzado (FST), y para la ansiedad, test del laberinto elevado (EPM). En el caso del condicionamiento de miedo en los animales, se realizaron los test de retención de memoria de miedo y extinción de miedo contextual. El comportamiento animal fue grabado y analizado usando el Any-maze software (Stoelting Co, Illinois, USA). f) Análisis morfológicos e inmunohistoquímica: se realizó preparación histológica de tejidos (corteza prefrontal e hipocampo), análisis inmunohistoquímico de células GFAP+ y análisis cuantitativo fractal (área celular, área de arborización y lacunaridad). Información in extenso en publicaciones respectivas. g) Análisis bioquímico: análisis de proteína fosfatasa calcineurina en el hipocampo y corteza prefrontal. Se utilizó anticuerpo policlonal de conejo para calcineurina (PP2B) que fue obtenida de Cell Signaling Technology. h) Análisis estadístico: descrito en cada publicación. Resumiendo, algunas de las conclusiones más importantes de esta tesis son: 1. La cotinina protege las células astrocíticas GFAP+, restaurando la supervivencia neuronal y la plasticidad después del estrés. 2. La cotinina, administrada vía intranasal, restaura las capacidades cognitivas y previene o mejora la conducta depresiva inducida por el estrés. 3. La cotinina intranasal sola o en combinación con aceite de krill, facilita la extinción de la memoria de miedo contextual y disminuye el comportamiento depresivo, mediante un mecanismo que involucra la estimulación de la expresión de la calcineurina, después del condicionamiento de miedo en ratones. 4. La cotinina intranasal más aceite de krill, reduce los síntomas depresivos derivados de recuerdos traumáticos asociativos inducidos por el comportamiento de miedo, en forma más efectiva que la cotinina administrada como terapia única. 5. La mezcla de cotinina más aceite de krill, evitó el comportamiento depresivo, la alteración de la memoria y los trastornos en los astrocitos, inducidos por la restricción prolongada del movimiento.Universidad Pablo de Olavide de Sevilla. Escuela de DoctoradoPostprin