Respuesta inmune a gangliósidos en un modelo experimental de neuropatía /

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2016Los gangliósidos, glicanos propios abundantes en tejido neural, han sido propuestos como los principales blancos antigénicos en el Síndrome de Guillain-Barré (SGB). Aunque la etiología de esta enfermedad de tipo autoinmune es desconocida, se cree que la respuesta inmune elaborada hacia un patógeno, podría reaccionar en forma cruzada con gangliósidos de los nervios periféricos. Conejos inmunizados con una mezcla de gangliósidos de cerebro bovino (BBG) y hemocianina de lapa californiana (KLH por su sigla en inglés) como proteína carrier, desarrollan una neuropatía clínicamente similar al SGB. Sin embargo, la enfermedad no se produce si en lugar de utilizar KLH se emplea albúmina de suero bovino metilada (BSAm). Con el objeto de caracterizar el desarrollo de la respuesta inmune humoral en este modelo animal, grupos de conejos fueron inmunizados con distintos inmunógenos. Un grupo fue inmunizado con KLH/BBG y otro con BSAm/BBG. Con el objetivo de evaluar la función carrier de KLH en el modelo experimental, otros dos grupos fueron inmunizados en base a un protocolo alternativo de inmunización (BSAm/BBG+KLH y KLH+BBG), en el que KLH se administra en emulsiones separadas. Además, se utilizaron dos grupos controles inmunizando sólo con BBG o sólo con KLH. Se evaluaron tanto los signos clínicos como la respuesta inmune generada (título, isotipo y especificidad de los anticuerpos anti-gangliósidos). Todos los animales inmunizados con KLH/BBG mostraron signos clínicos de neuropatía y se les detectaron inmunoglobulinas de isotipo G (IgG) que reconocen a gangliósidos de estructura simple (GA1) y compleja (GM1 y GD1b). Estos anticuerpos fueron parcialmente bloqueados por pre-incubación con KLH soluble indicando su reactividad cruzada. El porcentaje de reactividad cruzada con KLH se modificó a lo largo del tiempo (cambio de la especificidad de los anticuerpos). La reducción en el porcentaje de anticuerpos con reactividad cruzada coincide generalmente con el comienzo de los signos clínicos. Ningún animal de los grupos controles (Grupos BBG o KLH) se enfermó, y sólo en aquellos inmunizados con KLH se detectó una leve reactividad de anticuerpos de isotipo IgG que reconocen GA1 y que son totalmente bloqueados por preincubación con KLH soluble. Utilizando la lectina del maní (PNA) se corroboró en KLH la existencia de un determinante presente también en GA1/GM1/GD1b Galβ1-3GalNAc). Si bien el grupo BSAm/BBG no enfermó, al inmunizar por separado también con KLH (BSAm/BBG+KLH) se revirtió esta situación y se generó la neuropatía. Sin embargo, la inmunización con BBG y KLH por separado (KLH+BBG) no produce signos clínicos de enfermedad. Finalmente, entre los animales que desarrollaron la neuropatía, aquellos que enfermaron tempranamente presentaron un mayor porcentaje de anticuerpos anti-GA1 de alta afinidad en suero pre-inmune, comparado con aquellos que enferman de forma tardía. Estos resultados sugieren que, la presencia de KLH en la inmunización es requerida para generar la enfermedad. Los anticuerpos comenzarían reconociendo los azúcares terminales compartidos entre KLH y GA1 para luego expandir la región identificada. Como consecuencia, se produce un cambio de especificidad de los anticuerpos hacia los gangliósidos, acompañado del comienzo de la neuropatía. Si bien los gangliósidos no poseen la capacidad de generar una respuesta de isotipo IgG, podrían re-direccionar la respuesta anti-GA1 inducida por KLH hacia gangliósidos con estructuras más complejas. Tanto la especificidad fina, como la afinidad de los anticuerpos resultaría clave en el comienzo de la neuropatía, incluso un elevado porcentaje de anticuerpos anti-GA1 de alta afinidad en suero pre-inmune se asoció con el comienzo temprano de la misma. Se establecen dos conclusiones principales. En primer lugar, KLH estaría cumpliendo el papel tanto de carrier como de inmuno-estimulador específico. En segundo lugar, el factor de susceptibilidad a desarrollar la neuropatía podría estar relacionado a la afinidad de los NOAbs anti-GA1 presentes en el suero pre-inmune. Según nuestro conocimiento, este trabajo es el primero no sólo en describir en detalle la respuesta inmune generada durante el desarrollo de la neuropatía en un modelo experimental, sino también en establecer un posible factor de susceptibilidad del huésped.Funes, Samanta. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina.Nores, Gustavo Alejandro. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina.Cuadra, Gabriel Ricardo. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Farmacología. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Farmacología Experimental de Córdoba; Argentina.Irazoqui, Fernando José. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina.Pistoresi de Palencia, María Cristina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina.Cremaschi, Graciela Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; Argentina