Determination of murine brown adipocytes phenotype under different culture conditions in vitro

Celem pracy było określenie wpływu dwóch różnych pożywek różnicujących na fenotyp mysich adipocytów brązowej tkanki tłuszczowej w hodowli in vitro. W celu przeprowadzenia analizy ilościowej wykorzystano metodę qPCR pozwalającą określić poziom ekspresji genu kodującego białko UCP1, kluczowy marker brunatnej tkanki tłuszczowej. Żeby porównać metabolizm komórek zmierzono tempo zużycia tlenu (OCR) za pomocą testu Mito Stress.Adipocyty brunatniej tkanki tłuszczowej zróżnicowane na dwa sposoby posiadają wyraźne różnice w ekspresji UCP1 na poziomie mRNA. W adipocytach zróżnicowanych za pomocą medium 2 ekspresja UCP1 jest 11,96 razy większa niż w adipocytach zróżnicowanych za pomocą medium 1. Badania metabolizmu komórkowego potwierdziły, że komórki różnicowane medium 2 wykazują podwyższoną konsumpcję tlenu niezwiązaną z produkcją ATP oraz wzrost wycieku protonów. To świadczy o większej zawartości mitochondriów oraz białka UCP1 w komórkach różnicowanych medium 2.Użycie medium różnicującego 2 pozwala na uzyskanie adipocytów BAT o cechach fenotypowych bardziej zbliżonych do BAT w warunkach in vivo, co może stać się dobrym narzędziem do badań nad brunatną tkanką tłuszczową.The aim of this study was to determine the effects of two differentiation media on the murine brown adipocytes phenotype in vitro. qPCR method was applied to assess changes in UCP1 gene expression, which is known as the key brown fat marker. In order to compare the cell metabolism, the oxygen consumption rate (OCR) was measured using the mitochondrial stress test procedure.Conducted research showed a clear difference in mRNA expression of UCP1. Gene expression analysis of UCP1 showed that there was significant increase of 11,96-fold in relative gene expression for cells differentiated by medium 2 as compared to cells differentiated by medium 1. Studies of cellular metabolism confirmed the growth in oxygen consumption unrelated to ATP production and an increase in proton leak. The results obtained indicate an increased number of mitochondria and UCP1 in cells differentiated by medium 2.Using the differentiation medium 2 allows to obtain brown adipocytes phenotypically much closer to that found in BAT in vivo, which can be a good tool for research on brown adipose tissue