Isolation and preliminary identification some of secondary metabolites from Ruta chalepensis L. and Ruta macrophylla Sol. in vitro cultures.

W ramach niniejszej pracy prowadzono kultury płynne stacjonarne in vitro dwóch gatunków ruty: Ruta chalepensis i Ruta macrophylla. Prowadzono je na podłożu Linsmaier – Skoog (LS) z dodatkiem regulatorów wzrostu i rozwoju roślin: 1 mg/l NAA i 1 mg/l BAP. Kolejnym etapem, stanowiącym jednocześnie główny cel omawianej pracy, była izolacja oraz wstępna identyfikacja metabolitów wtórnych obecnych w kulturach in vitro badanych gatunków. Metanolowe ekstrakty z biomasy frakcjonowano na kolumnie chromatograficznej wypełnionej żelem krzemionkowym, wymywając ją wybranymi rozpuszczalnikami o wzrastającej polarności. Otrzymano po 8 frakcji dla każdego gatunku, z czego dalej analizowano 5 frakcji z R. chalepensis oraz 1 frakcję z R. macrophylla. Dalszej izolacji oraz identyfikacji dokonywano za pomocą chromatografii cienkowarstwowej TLC, wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC) oraz spektroskopii magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR) i spektrometrii masowej (MS).W wyniku przeprowadzonych badań stwierdzono, że kultury in vitro R. chalepensis i R. macrophylla akumulują głównie kumaryny. Z biomasy pozyskanej z kultur in vitro R. chalepensis wyizolowano i wstępnie zidentyfikowano metodami analitycznymi (HPLC, widmo UV) 8 kumaryn: ksantotoksynę, psoralen, bergapten, ostol, izopimpinelinę, skopoletynę, imperatorynę i izoimperatorynę. Metodami spektralnymi (MS i 1H-NMR) potwierdzono strukturę ksantotoksyny. Z biomasy pozyskanej z kultur in vitro R. macrophylla wyizolowano i wstępnie zidentyfikowano, metodami analitycznymi (HPLC, widmo UV) 5 związków kumaryn: ksantotoksynę, psoralen, bergapten, ostol i izopimpinelinę.As part of this work, in vitro stationary liquid cultures of two species of rue were carried out: Ruta chalepensis and Ruta macrophylla. They were carried out on Linsmaier - Skoog (LS) medium with the addition of plant growth and development regulators: 1 mg / l NAA and 1 mg / l BAP. The next stage, constituting at the same time the main goal of the discussed work, was the isolation and preliminary identification of secondary metabolites present in in vitro cultures of the species under the study. The methanolic biomass extracts were fractionated on a chromatography column packed with silica gel, eluting with selected solvents of increasing polarity. 8 fractions were obtained for each species, of which 5 fractions from R. chalepensis and 1 fraction from R. macrophylla were analyzed further. Further isolation and identification was done by TLC, High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and Nuclear Magnetic Resonance (NMR) spectroscopy and mass spectrometry (MS). As a result of the research, it was found that in vitro cultures R. chalepensis and R. macrophylla mainly accumulate coumarins. From biomass obtained from in vitro cultures of R. chalepensis was isolated and initially identified by analytical methods (HPLC, UV spectrum) 8 coumarins: xanthotoxin, psoralen, bergapten, osthol, isopimpinellin, scopoletin, imperatorin and isoimperatorin. The xanthotoxin structure was confirmed by spectral methods (MS and 1H-NMR). From biomass obtained from R. macrophylla in vitro cultures, 5 coumarins: xanthotoxin, psoralen, bergapten, osthol and isopimpinellin were isolated and predefined by analytical methods (HPLC, UV spectrum)