Mutagenesis of Porphyromonas gingivalis' RgpA protein

Gingipainy to konserwatywne proteazy cysteinowe, odpowiedzialne za znaczącą część aktywności proteolitycznej bakterii Porphyromonas gingivalis. Niniejsza praca poświęcona jest jednej z gingipain R- białku RgpA i ma na celu zbadanie roli cyklizacji N-końcowej glutaminy na aktywność białka. W tymże białku wprowadzono mutację punktową- zamianę pierwszego aminokwasu, jakim była glutamina, na asparaginę, co zapobiegało cyklizacji N-końcowego aminokwasu przez cyklazę glutaminylową. Zastosowano metodę SLIM (z ang. site-directed ligase-independant mutagenesis). Wprowadzenie mutacji powiodło się, utworzony został nowy szczep P. gingivalis RgpA Q1N. Mutacja skutkowała obniżeniem aktywności proteolitycznej białka co wskazuje na ważną rolę cyklizacji glutaminy w procesie dojrzewania białka RgpA.Gingipains are conservative cysteine proteases responsible for majority of general proteolytic activity of Porphyromonas gingivalis bacteria. The presented work is dedicated to one of gingipain R- RgpA protein and aimed to evaluate the importance of its N-terminal glutamine cyclisation for its proteolytic activity. RgpA protein has been mutated; its first amino acid has been changed from glutamine to asparagines what prevented glutamine cyclisation by the QC enzyme (glutaminyl cyclase). The method that has been used is SLIM (site-directed ligase-independent mutagenesis). The mutagenesis succeeded and the new strain P. gingivalis RgpA Q1N was established. The activity of mutated protein decreased, indicating the importance of glutamine cyclisation for RgpA maturation