In vivo model of Mucopolysaccharidosis type IIIB

Przedmiotem badań niniejszej pracy magisterskiej było zbadanie wpływu dekstranu zawierającego grupy glicydylotrimetyloamoniowe (Dex-GTMAC2) na usuwanie glikozaminoglikanów (GAG) z organizmu w mysim modelu MPS IIIB. Dex-GTMAC2 wykazuje zdolność elektrostatycznego oddziaływania z siarczanem heparanu (HS). W badaniach wykorzystano myszy C57BL/6, posiadające mutację w genie Naglu, kodującym N-acetyloglukozaminidazę (Naglu), enzym odpowiedzialny za rozkład HS. Z powodu mutacji dochodzi do gromadzenia się GAG w lizosomach komórek i zaburzenie ich prawidłowego funkcjonowania. Myszom MPS oraz WT podano dekstran znakowany fluorescencyjnie. Analiza intensywności fluorescencji oraz stężenia GAG w moczu oraz tkankach, niestety nie wskazuje na lecznicze działanie testowanego związku w tygodniowym eksperymencie.Kolejnym etapem badań, było podanie dodatkowej dawki HS znakowanego rodaminą B do organizmu. Związek w większości usuwany jest w przeciągu ok. 4h od podania. Jednak zastosowanie klatek metabolicznych, wskazuje na znacznie dłuższą retencję (do 6-8 h). Pomiar intensywności fluorescencji oraz analiza stężenia GAG w moczu, wskazuje na usuwanie tych związków zarówno z krwiobiegu, jak i akumulowanych w nerkach.The aim of the study was to investigate the effect of dextran which was modified by adding glycidyltrimethylammonium group (Dex-GTMAC2) on removal of glycosaminoglycans (GAG) in MPS IIIB murine model. Dex-GTMAC2 combine with heparan sulfate (HS) by electrostatic interactions. In this research we used C57BL/6 mouse strian with mutated Naglu gene which encodes N-acetylglucosamidase, enzyme responsible for HS degradation. Mutation couse accumulation of GAG in cells lysosymes which disrupt many physiologcal procses in the cells. Both MPS and WT mice received dextran labeled with Rohdamine B. Fluorescence intensity and GAG concentration analysis in urine and tissues, doesn’t show any treatment effects of dextran during weekly experiment.Second part of research was based on adding extra dose of HS labeled Rohdamine B to organism. The majoraty of GAG is removed in 4h. Useing metabolic cages showed longer retention in body (6-8 h). Fluorescence intensity and GAG concentration analysis in urine, show that HS is removed both from blood circulation and kidneys