In-situ spectroscopic studies of biochemical changes associated with the transport of substances with potential therapeutic activity into the cells.

Konfokalna mikroskopia ramanowska jest użyteczną techniką w badaniu zmian biochemicznych zachodzących w komórkach. W niniejszej pracy zbadano tworzenie się kropli lipidowych w komórkach śródbłonka pod wpływem stymulacji komórek wielonienasyconymi kwasami tłuszczowymi. Krople lipidowe są niewielkimi, wielofunkcyjnymi organellami komórkowymi biorącymi udział między innymi w magazynowaniu kwasów tłuszczowy, lecz ich dokładny wpływ na funkcjonowanie komórek śródbłonka nie jest znany. W pomiarach wykorzystano komórki ludzkie śródbłonka linii HMEC-1 oraz kwasy arachidonowy oraz jego deuterowaną pochodną, a także kwas eikozapentaenowy i dokozaheksaenowy. Kwasy te są niezbędne do prawidłowego działania tkanek, a ich metabolity mają kluczowe znaczenie w kontrolowaniu procesów zapalnych. Pomiary techniką konfokalnej mikroskopii ramanowskiej potwierdziły tworzenie się w komórkach stymulowanych kropli lipidowych. Wykorzystując deuterowaną pochodną kwasu arachidonowego potwierdzono obecność jego egzogennej pochodnej w formujących się kroplach. Pomiary komórek stymulowanych kwasem eikozapentaenowym i dokozaheksaenowym także wykazały tworzenie się kropli lipidowych, o składzie wskazującym na kwasy o wyższym stopniu nienasycenia. Ze względu na niestabilność kwasu dokozaheksaenowego, komórki stymulowane tym kwasem charakteryzowały się nietypowym widmem kropli lipidowych, a pod wpływem wyższych stężeń kwasu, nie ulegały utrwaleniu.Confocal Raman microscopy is a powerful method in investigation of biochemical changes in cells. In this work forming of lipid droplets upon the stimulation of cells by polyunsaturated fatty acids was studied. Lipid droplets are lipid-rich cellular organelles which role in the biochemistry of endothelial cells isn't well known. In measurements human microvascular endothelial cells were used. Arachidonic, deutered arachidonic, eicosapentaenoic and docosahexaenoic acids were used to stimulate cells to formation of lipid droplets. Metabolites of these polyunsaturated fatty acid have a significant role in control of inflammation in cells. The incubation of endothelial cells with polyunsaturated fatty acids resulted in growth of lipid droplets. The measurements of cells stimulated with deuterated arachidonic acid gave a proof for an appearance of exogenic polyunsaturated fatty acids inside of formed lipid droplets. The measurements of cells stimulated with high-concentrated docosahexaenoic acid were unsuccessful, the spectra of lipid droplets from cells stimulated with low-concentrated docosahexaenoic acid showed an unusual position and shape of specific bands, which may be associated with instability of this acid