Cloning, expression and preliminary characterisation of PG0263 - one of the important components of Porphyromonas gingivalis unique secretion system

Porphyromonas gingivalis jest jedną z bakterii przyczyniających się do zapoczątkowania i rozwoju paradontozy. Najważniejszymi czynnikami wirulencji tej bakterii są proteazy cysteinowe zwane gingipainami, które wydzielane są przez unikatowy, bardzo słabo poznany system sekrecji zwany T9SS. W niniejszej pracy do wektora pET 28a wklonowano gen pg0263 kodujący jedno z unikatowych białek.Dokonano również optymalizacji warunków ekspresji białka z użyciem dwóch szczepów ekspresyjnych E. coli. Okazało się, że białko to produkowane jest w postaci ciałek inkluzyjnych i pomimo sprawdzenia kilku parametrów ekspresji nie udało się poprawić jego rozpuszczalności.Porphyromonas gingivalis is one of the pathogens involved in the development and progression of chronic periodontitis. The most important virulence factors of this bacterium are cysteine proteases, called gingipains which are secreted via a unique, still poorly understood secretion system known as T9SS. In this work pg0263 gene coding one of unique proteins was cloned into pET28a expression vector. Optimization of expression conditions was also performed. It turned out that this protein is produced as inclusion bodies and changes of expression conditions did not improve its solubility