Identification and determination of selected fluoroquinolones by thin-layer chromatography with densitometry detection.

Przedmiotem niniejszej pracy był rozdział wybranych fluorochinolonów przy pomocy chromatografii cienkowarstwowej cieczowej (TLC). Do badań użyto następujące roztwory orbifloksacyny , danofloksacyny, ciprofloksacyny, norfloksacyny, enrofloksacyny, marbofloksacyny i flumechiny oraz difloksacyny , sparfloksacyny, pefloksacyny, lomefloksacyny, ofloksacyny, balofloksacyny i prulifloksacyny. W celu znalezienia optymalnych warunków rozdziału powyższych fluorochinolonów przebadano pięć różniących się składem faz ruchomych oraz trzy fazy stacjonarne. Badane roztwory nanoszono na płytki TLC, HPTLC oraz HPTLC LiChrospher w objętości 5 µl, następnie rozwijano je w komorach chromatograficznych o różnych rozmiarach, gotowe chromatogramy oglądano pod lampą UV, a potem poddawano skanowanowaniu przy długości fali λ=320 nm.Po przeanalizowaniu zarejestrowanych densytogramów stosując fazę ruchomą o składzie 1,4- dioksan : amoniak : tetrahydrofuran ( 6 : 3 : 2 v/v/v) oraz płytki HPTLC LiChrospher uzyskuję sie najlepszą jakość rozdziału badanych fluorochinolonów.W celu sprawdzenia przydatności opracowanej metody chromatograficzno-densytometrycznych do oznaczeń ilościowych zbadano następujące parametry: specyficzność, liniowość, limit wykrywalności (LOD) i limit oznaczalności (LOQ). Przeprowadzona walidacja metody wykazała, że jest ona specyficzna, selektywna , posiada szeroki zakres liniowości oraz może być stosowana do dalszej analizy danych związków w płynach fizjologicznych człowieka i w tkankach zwierząt.The subject of this dissertation was the separation of selected fluoroquinolones with the help of thin layer chromatography (TLC). Following solutions of orbifloxacin, danofloxacin, ciprofloxacin, norfloxacin, enrofloxacin, marbofloxacin, flumequine and difloxacin, sparfloxacin, pefloxacin, lomefloxacin, ofloxacin, balofloxacin, prulifloxacin were used for the examinations. In order to find optimum conditions for the separation of mentioned fluoroquinolones we examined five different mobile phases and three stationary phases. Tested solutions were applied on the TLC, HPTLC and HPTLC LiChrospher plates at the volume of 5µl and afterwards they were spreaded in the chromatographic chambers of different sizes. Prepared chromatograms were observed under the UV light and then submitted for scanning at the λ=320 nm wave length. The best separation quality of the examined fluoroquinolones was obtained after the analyse of recorded densitograms using the mobile phase containing 1,4-dioxane : ammoniac : tetrahydrfuran ( 6 : 3 : 2 v/v/v) and HPTLC LiChrospher plates.In order to check the usability of the prepared chromatographical-desitometry method for the quantity measurments, following parameters were tested: specificity, linearity, limit of detection (LOD) and limit of quantification (LIQ). Performed validation of the method has proven that it is specific, selective, it has broad spectrum of linearity and it can be used for the further analyse of particular compounds in the physiological fluids of human and the animals’ tissue