Optimising conditions for the determination of selected the fatty acids in human plasma

Cel: Określenie warunków oznaczania wybranych nienasyconych kwasów tłuszczowych w osoczu ludzkim.Metody: Zastosowano dwie metody przygotowania próbek osocza wykorzystujące różne odczynniki derywatyzujące: siarczan(VI) dimetylu (metoda 1) i bromek pentafluorobenzylowy (metoda 2). Technika: Analizy prowadzono przy użyciu chromatografii gazowej sprzężonej z detekcją masową, z analizatorem typu potrójny kwadrupol.Wyniki: Ustalono warunki rozdzielenia chromatograficznego dla każdej z metod. Czas analizy pojedynczej próbki w metodzie pierwszej wyniósł 23,67 min, a w metodzie drugiej 27,67 min. Procedury przygotowania próbek osocza zawierającego kwasy tłuszczowe zostały zoptymalizowane. Metoda 1: sekwencja ‘derywatyzacja-ekstrakcja’, czas ekstrakcji (20 min), krotność ekstrakcji (4-krotna), objętość ekstrahenta (0,5 ml), czas derywatyzacji (30 min), temperatura derywatyzacji (55°C). Metoda 2: sekwencja, czas, krotność ekstrakcji i objętość ekstrahenta – jak w metodzie 1, czas derywatyzacji (40 min), temperatura derywatyzacji (37°C). Dla potrzeb analizy ilościowej, wybrano wzorzec wewnętrzny: kwas dokozadienowy - w każdej z metod. W metodzie 1, w próbce osocza ludzkiego zidentyfikowano cztery badane kwasy tłuszczowe. Jednak w metodzie 2 nie zidentyfikowano żadnego z analizowanych kwasów tłuszczowych. Wnioski: Otrzymane wyniki wykazały, iż tylko metoda wykorzystująca pochodne metylowe jest właściwa do analizy ilościowej wybranych nienasyconych kwasów tłuszczowych w osoczu ludzkim techniką GC-MS.Aim: Optimising conditions for the determination of selected the fatty acids in human plasma.Methods: Two methods for plasma samples preparation with two different derivatization reagents: sulphate(VI) dimethyl (method 1) and pentafluorobenzyl bromide (method 2) were used.Technique: Analyses were performed applying gas chromatography coupled with a mass spectrometer (equipped with a triple quadrupole mass analyzer). Results: The chromatographic separation conditions have been established for each of the methods. For the first method, analysis time for one sample is 23,67 min and for the second method - 27,67 min. The procedures for plasma samples containing fatty acids were optimized. Method 1: sequence 'derivatization-extraction’, extraction time (20 min), extracted four times, volume of extracting reagant (0.5 ml), derivatization time (30 min), derivatization temperature (55°C). Method 2: the sequence, the extraction time, extracted times and volume of the extractant – are as in method 1, however, the derivatization time is 40 min and the derivatization temperature 37°C. For the purpose of quantitative analysis, the selected internal standard: docosadienoic acid - in each of the methods. In method 1, in a sample of human plasma identified four selected fatty acids. However, in method 2 has not identified any of the analyzed fatty acid.Conclusion: According to the obtained results, only method using methyl derivatives can be employed for quantitative analysis of the selected fatty acids in human plasma by GC-MS