Direct and indirect photodynamic stress induced by Zinc-pheophorbide in murine liver - Histological analysis

Jedną z głównych ról wątroby jest filtracja toksyn, w tym metabolizm leków do związków mniej toksycznych, i łatwiejszych do usunięcia z ustroju. Jednak reakcje metaboliczne leków mogą doprowadzić do polekowego uszkodzenia wątroby.W niniejszej pracy podjęto próbę oszacowania wpływu terapii fotodynamicznej (PDT) ludzkiego gruczolakoraka płuc rosnącego u myszy, na wątrobę.Myszom BALB/cA nude wszczepiono, podskórnie przy tylnej łapie, komórki ludzkiego gruczolakoraka płuc linii A549. Zwierzęta zostały poddane terapii fotodynamicznej z użyciem feoforbidu cynkowego (Zn-Pheide). Związek podawany był dootrzewnowo lub do żyły ogonowej. Dawka fotouczulacza wynosiła 1-10mg/kg masy ciała zwierzęcia. Guz naświetlano przez 20 minut, 70 lub w czasie 140 minut po podaniu związku. Obserwacja myszy i guzów trwała około 120 dni. W niniejszej pracy badano również wątrobę myszy C57BL/6 poddanych bezpośredniemu stresowi fotodynamicznemu, indukowanego Zn-Pheide ,w dawce iv 2mg/kg masy ciała, i światłem.Przeprowadzono barwienia hematoksylina-eozyna, May-Grünwald-Giemsa oraz barwienie immunohistochemiczne skierowane przeciwko neutrofilom lub makrofagom. Podczas analizy preparatów zaobserwowano zmiany histologiczne hepatocytów. U dwóch myszy nude zauważono obszary martwicy w postaci mini-zawałów, wokół których powstały nacieki komórek układu odpornościowego. Zwierzętom tym podano fotouczulacz dootrzewnowo i można przypuszczać, że bezpośredni kontakt ze związkiem wpłynął negatywnie na organ. U wielu myszy nude zauważono w wątrobach obszary wczesnej apoptozy. W wątrobach myszy C57BL/6 traktowanych PDT znaleziono obszary silnej nekrozy ischemicznej. Natomiast u myszy C57 poddanych kontroli (sam fotouczulacz lub samo światło) nie zaobserwowano zmian.Podczas przeprowadzenia barwienia immunohistochemicznego zaobserwowano również wpływ czasu utrwalania narządów na wyniki barwienia. Im dłuższy czas (około miesiąca) utrwalania organów w formalinie tym gorsze są wyniki barwienia.Filtration of toxins, including drug metabolism is the main role of liver. However, the metabolic reactions of drugs can lead to drug-induced liver injury (DILI).In the present thesis influence of the photodynamic therapy on murine liver was evaluated. As a model, the human lung A549 adenocarcinoma tumors growing in BABL/cA nude mice were investigated. Several photodynamic therapy protocols have been tested applying Zinc-Pheophorbide as a photosensitizer (PS). The PS doses varied (1-10 mg/kg body weight). The PS was administrated either ip and iv. Observation of the treated tumors was conducted for about 120 days.Direct photodynamic stress was assessed in the liver of C57BL/6 mice. The animals followed the stress induced by Zn-Pheide ( iv 2mg/kg) and red light.Livers were dehydrated and embedded in paraffin. A 5 μm slides of liver were stained with hematoxylin and eosin, and May-Grünwald-Giemsa stainings. Also, the immunohistochemistry methods for the detection of neutrophils or macrophages were used.In numerous murine liver the areas of early apoptosis were found, this might be a characteristic feature of BALB/cA nude mice. In liver of two individuals followed ip injections of PS white infarctions were found. This might be because of direct contact between the photosensitizer and the liver tissue