In vitro regeneration of Rumex tianschanicus x Rumex patientia - histological, SEM and flow cytometry analysis

Celem pracy było określenie typu regeneracji in vitro Rumex tianschanicus x Rumex patientia przy pomocy analizy histologicznej, SEM oraz cytometrycznej.Z siewek 7 - oraz 12 - dniowych pobierano hypokotyle i umieszczano na pożywce MS + 2% sacharoza + 0.17 mg/l IAA+ 2.2 mg/l BAP. Zregenerowane pędy przybyszowe ukorzeniano na 1/2 MS + 0.5 mg/l IBA a następnie aklimatyzowano do warunków polowych. Wydajność kaulogenezy w przypadku hypokotyli 7 - dniowych wyniosła 44,23%, a 12 - dniowych 44,16%.Analiza histologiczna wykazała, że regeneranty uzyskano drogą regeneracji bezpośredniej z komórek perycyklu walca osiowego. Zaobserwowano także wtórną organogenezę. W kulturze widoczne były dwa typy niemorfogennego kalusa: zielony, drobny, zbity oraz biały, dobrze uwodniony, o większych komórkach. Dodatkowo, analiza histologiczna oraz SEM wykazała obecność struktury podobnej do ECM (Extracellular Matrix). Zawartość jądrowego DNA u roślin zregenerowanych in vitro była podobna do roślin donorowych R. tianschanicus x R. patientia (około 4.6 pg/2C).The aim of this study was to investigate the pathway of in vitro regeneration in Rumex tianschanicus x Rumex patientia using histological, SEM and flow cytometry analysis. The hypocotyls were collected from 7 – and 12- day – old seedlings and placed on medium MS + 2% sucrose + 0.17 mg / l IAA + 2.2 mg / l BAP. Regenerated adventitious shoots were rooted on 1/2 MS + 0.5 mg / l IBA and acclimated to field conditions. The efficiency of caulogenesis in 7 – day – old hypocotyls was 44.23% and in the case of 12 – day – old 44,16%. Histological analysis showed, that regenerants were obtained by direct organogenesis from pericycle cells and secondary organogenesis was also observed. There were formed two types of nonmorphogenic callus: green, small, compact and white, well-hydrated, with larger cells. Additionally, histological and SEM analysis revealed the presence of structure similar to ECM (Extracellular Matrix). The amount of nuclear DNA in plantlets regenerated in vitro was similar to donor plants R. tianschanicus x R. patientia (about 4.6 pg/2C)