Cytotoxic effect of earthworm coelomic fluids on melanoma cells

Ekstrakty z dżdżownic są od dawna używane w ludowej chińskiej medycynie do leczenia wielu różnych chorób. Płyn celomatyczny wypełniający jamę ciała dżdżownic zawiera immunokompetentne komórki zwane celomocytami odpowiedzialne za niszczenie patogenów poprzez wydzielanie cząsteczek immunnoaktywnych. Badania ostatnich lat wskazują, że składniki zawarte w płynie celomatycznym mają również aktywność przeciwnowotworową. Zidentyfikowano kilka białek płynu celomatycznego, które w warunkach in vitro prowadzą do śmierci komórek nowotworowych raka szyki macicy HeLa oraz komórek nowotworu wątroby na drodze apoptozy, między innymi glikoproteinę G-90 oraz kompleks enzymów fibrynolitycznych EFE. Są to jednak wyniki wstępne, które wymagają weryfikacji i kolejnych testów na innych liniach komórkowych, tak by uzyskany efekt miał charakter bardziej uniwersalny. Dlatego celem badań wykonanych w ramach niniejszej pracy było określenie wpływu płynu celomatycznego pochodzącego od dwóch gatunków dżdżownic Eisenia andrei i Aporectodea caliginosa na komórki czerniaka różniące się miejscem pochodzenia i stopniem progresji. Materiał badań stanowiła linia komórkowa IGR-39 wyprowadzona z komórek czerniaka skóry, linia mel-202 – wyprowadzona z błony naczyniowej czerniaka oka oraz linia A375 pochodząca z fazy metastatycznej rozwoju czerniaka.Uzyskane w teście kolorymetrycznym Cell Titer wyniki wskazują na działanie cytotoksyczne płynów celomatycznych obu gatunków dżdżownic na wszystkie badane komórki czerniaka w sposób zależny od dawki. Barwiąc komórki DAPI wykazano, ze wśród komórek ginących w obecności płynu celomatycznego są komórki, które wykazują morfologię typową dla apoptozy. Wstępne wyniki uzyskane w ramach niniejszej pracy wymagają dalszych badań, szczególnie interesujące jest, jaki czynnik(i) odpowiada(ją) za uzyskany efekt cytotoksyczności i apoptozy. Ponadto, czy mimo różnic w składzie białkowym płynów celomatycznych Eisenia andrei i Aporectodea caliginosa, za niszczenie komórek nowotworowych odpowiada ten sam czynnik.Earthworms have long been used in traditional Chinese medicine to treat many different diseases. Coelomic fluid filling the body cavity earthworms contains immunocompetent cells called coelomocytes that are responsible for the destruction of pathogens by secreting immunocompetnet molecules. Recent studies show that the ingredients contained in the coelomic fluid also have antitumor activity. Identified several proteins coelomic fluid which in vitro leads to the death of cervical cancer cells HeLa and liver cancer cells by apoptosis, including glycoprotein G-90 and the fibrinolytic enzyme complex EFE. However, these are preliminary results that require review and further testing on other cell lines, so that the obtained effect was more universal. Therefore, the purpose of research conducted in the framework of this study was to determine the effect of coelomic fluid derived from two species of earthworms Eisenia andrei and Aporectodea caliginosa on melanoma cells differing in origin and the degree of progression. The research material was a cell line IGR-39 melanoma cells derived from skin, mel-202 line - derived from uveal melanoma of the eye and the line A375 derived from the phase of the development of metastatic melanoma.The resulting colorimetric Cell Titer test results indicate a cytotoxic effect of coelomic fluid two species of earthworms in all tested melanoma cells in a dose dependent manner. DAPI staining cells demonstrated that the dying cells in the presence of coelomic fluid are cells that exhibit the typical morphology of apoptosis. Preliminary results obtained in this study require further investigation, particularly interesting is, what factor (s) responsible (s) for the obtained effect of cytotoxicity and apoptosis. Moreover, despite their differences in protein composition of coelomic fluid Eisenia andrei and Aporectodea caliginosa, for the destruction of tumor cells corresponding to the same factor