Symbiotic Relationship between Vegetation and AM Fungi at Dayukeng Fumarole Area in Tatun Volcano Group

大屯火山群長年受到後火山作用之影響，形成特殊的土壤環境及獨特的硫磺區植群組成，部分區域土壤之pH值甚至僅2.6，土壤之全氮量為0.01%，土壤有效磷為2.49 mg kg-1，只有少數耐極酸性土壤之植物能自然生存其間。本研究針對該地區大油坑附近，進行土壤化學性質分析及叢枝菌根菌調查，目的在於瞭解菌根菌組成與土壤及植群間之關係，結果發現Entrophospora columbiana 及Glomus clarum為硫磺噴氣口白背芒 (Miscanthus sinensis var. glaber) 之主要共生菌種，然而隨著遠離噴氣口，其植相與共生之菌種多樣性也明顯地提升，共計發現有叢枝菌根菌7屬19種。此外，藉由裸土誘導繁殖試驗，發現距離植生較近的裸土中，仍然存在著菌根菌的繁殖體，且土壤中菌根菌的有無影響了白背芒是否可以在該地區存活。白背芒接種菌根試驗及植體的養分分析，証實大油坑地區的白背芒比南橫種源的白背芒有較高的發芽率，並且與大油坑地區的優勢菌根菌有較佳的共生效能。 大頭茶接種與菌根拓殖實驗，我們發現菌根菌在極酸土壤中能顯著促進大頭茶的生長，也更進一步證實白背芒的定植有助於叢枝菌根菌族群的建立，也連帶著幫助了後續植生在此棲地建立族群。叢枝菌根菌於不同性質土壤中對不同性質宿主之影響實驗，証實菌根菌對宿主植物沒有很高的專一性，土壤性質明顯影響了菌根菌能否與植物形成菌根，不同的植物與菌根菌均有其適生的土壤，但接種適當的菌根菌，就能有效改善植物於不適合生育地中生長狀況。白背芒磷酸鹽轉運蛋白基因表現實驗的結果發現白背芒與叢枝菌根菌共生後，由於叢枝菌根的菌絲網絡成了吸收和轉運磷過程中最主要的途徑，致使根部之磷酸鹽轉運蛋白基因表現呈下調的現象。Tatun volcano group preserves particular soils environment and solfatara vegetation in phenomena of post-volcanism all the year round. The soils in part of this place are extremely acid, soil pH, nitrogen and available phosphorus contents are 2.6, 0.01 %, 2.49 mg kg-1 respectively. There are only some extreme acid-tolerable plant species can survive in this area. In this study, the soil chemical properties and arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) composition were investigated to determine the relationship among them. We found that the main AMF symbiosis with Miscanthus sinensis var. glaber which predominate the fumarole are Entrophospora columbiana and Glomus clarum. The biodiversity of plants and AMF is increased with the distance from the Dayukeng fumarole, where 19 species in 7 genus were recorded. By means of bait culture in bare soil, there are still some propagules existed near the plants, which were related to the existence of Miscanthus sinensis var. glaber. In the AMF inoculation experiment, Miscanthus sinensis var. glaber from Dayukeng fumarole area revealed higher seeds generation rate and best symbiotic effect than those from Nanhen area. In the inoculation experiment of Gordonia axillaris, we demonstrated that AMF improve the nutrient availability of Gordonia axillaris in Dayukeng peculiar soil and corroborated that the existence of M. sinensis var. glaber is contributive to population establishment of AMF which help the successive plants to establish further. Inoculation experiment on different host plants and in distinct soil properties have been conducted. The result showed that AMF exhibit little host specificity but soil properties affect the synthesis of plant and fungi. Though different plants and AMF prefer living in different soil properties, but when the plants live in improper habitat, their growth could be improved by inoculating appropriate AMF. In the phosphorus transporter gene expression experiment, the gene expression in the root of M. sinensis var. glaber showed down-regulation, it implies that when M. sinensis var. glaber mycorrhized with AMF, the hyhpal system could play an important role for uptaking phosphorus.第壹章、緒論 1 第貳章、大油坑硫磺噴氣口鄰近地區土壤與叢枝菌根菌調查 3 一、前言 3 二、前人研究 6 三、材料與方法 8 (一)研究區域氣候環境概述 8 (二)土壤取樣及化學性質分析 8 (三)菌種分離及鑑定 9 (四)季節性變化與植群類型對菌根菌組成之影響 9 (五)叢枝菌根菌組成與土壤因子間之分布序列分析 10 四、結果 11 (一)土壤化學性質 11 (二)硫磺噴氣口鄰近植被內生菌根組成 11 (三)菌根孢子組成季節性變化 19 (四)季節變化與植群類型對菌種組成與孢子數之影響 23 (五)叢枝菌根菌組成與土壤因子間之分布序列分析 23 (六)土壤中孢子數量及種數與土壤化學性質之相關性分析 25 五、討論 28 第參章、大油坑硫磺噴氣口鄰近區域菌根菌對植被組成之影響 30 一、前言 30 二、前人研究 32 三、材料與方法 34 (一)裸土誘導繁殖 34 (二)白背芒接種試驗 34 (三)白背芒植體元素及養分分析 34 (四)大頭茶接種菌根菌與菌根菌拓殖實驗 35 (五)叢枝菌根菌於不同性質土壤中對不同性質宿主之影響實驗 35 四、結果 36 (一) 裸土誘導繁殖 36 (二)白背芒接種試驗 36 (三)白背芒植體元素及養分分析 38 (四)大頭茶接種菌根菌與菌根菌拓殖實驗 40 (五)叢枝菌根菌於不同性質土壤中對不同性質宿主之影響實驗 41 五、討論 49 第肆章、叢枝菌根菌共生對白背芒磷酸鹽轉運蛋白基因表現之影響 52 一、前言 52 二、前人研究 54 三、材料與方法 56 (一)RNA抽取 56 (二)RNA定量及變性膠體電泳分析 56 (三)互補DNA (complementary DNA, cDNA)合成 56 (四)白背芒磷酸鹽轉運蛋白編碼基因引子設計 57 (五)白背芒內參基因引子設計 59 (六)磷酸鹽轉運蛋白編碼基因親緣關係分析 (phylogenetic analysis) 59 (七)Real-time PCR 60 四、結果 62 五、討論 65 第伍章、總結 68 第陸章、參考文獻 69 附錄1. 大油坑噴氣口鄰近植生共生內生菌根菌名錄 (粗體為誘導培育分離鑑定菌種) 83 表目次 表1. 繡球菌門 (Glomeromycota) 新分類 (Oehl et al., 2011b) 5 表2.大油坑不同植生類型土壤養分化學性質 11 表3. 大油坑不同植群型主要伴生植物及內生菌根菌組成 12 表4. 大油坑地區叢枝菌根菌組成DCA分析結果 24 表5. 大油坑地區叢枝菌根菌組成CCA分析結果 24 表6. CCA分析結果之各環境因子與前4軸之相關性 25 表7. 白背芒於距離大油坑噴氣口100 m土壤4種不同叢枝菌根菌接種處理10個月後植株高度與葉寬比較 38 表8. 距離大油坑噴氣口100m土壤種植白背芒4種不同處理10個月後植體內養分組成 40 表9.大頭茶於距離大油坑噴氣口120 m及 20 m土壤不同菌根菌接種處理10個月後之生長表現比較 41 表10. Entrophospora columbiana、Scutellospora calospora、Acaulospora morrowiae 3種菌種於河砂、海砂、大油坑土3種土壤中與台灣櫸、黃槿、大頭茶形成菌根之狀況。 42 表11. 不同土壤接種菌根菌對黃槿苗高之雙向變方分析表 43 表12.黃槿於3種土壤中4種不同菌根菌接種處理10個月後之植株高度(cm) 43 表13. 不同土壤接種菌根菌對大頭茶苗高之雙向變方分析表 44 表14.大頭茶於3種土壤中4種不同菌根菌接種處理10個月後之植株高度(cm) 44 表15. 不同土壤接種菌根菌對台灣櫸苗高之雙向變方分析表 45 表16.台灣櫸於3種土壤中4種不同菌根菌接種處理10個月後之植株高度(cm) 45 表17. 不同土壤接種菌根菌對黃槿植株乾重之雙向變方分析表 45 表18.黃槿於3種土壤中4種不同菌根菌接種處理10個月後之植株乾重(g) 46 表19.不同土壤接種菌根菌對大頭茶植株乾重之雙向變方分析表 46 表20.大頭茶於3種土壤中4種不同菌根菌接種處理10個月後之植株乾重(g) 47 表21.不同土壤接種菌根菌對台灣櫸植株乾重之雙向變方分析表 47 表22.台灣櫸於3種土壤中4種不同菌根菌接種處理10個月後之植株乾重(g) 48 圖目次 圖 1.大油坑噴氣口鄰近植被土壤中內生菌根菌 16 圖 2.大油坑噴氣口鄰近植被土壤中內生菌根菌 17 圖 3.大油坑火山噴氣口鄰近植被土壤中內生菌根菌 18 圖 4.大油坑噴氣口鄰近植被土壤中內生菌根菌 19 圖 5.大油坑不同植群類型月 (1、4、7、10) 土壤單位孢子數量 19 圖 6. 大油坑不同植群類型月 (1、4、7、10)土壤中菌根菌孢子組成比例 21 圖 7. 陽明山小油坑管理站101年月均溫 22 圖 8. 陽明山小油坑管理站101年降雨月均量 22 圖 9.大油坑地區菌根菌調查樣點於DCA第1、第2軸之位置圖 26 圖 10.大油坑地區樣點與環境因子CCA雙序圖 26 圖 11.大油坑地區17種菌根菌與環境因子CCA雙序圖 27 圖 12. 白背芒種子於大油坑距噴氣口不同距離之土壤2個月後生長狀態比較 36 圖 13.白背芒接種Entrophospora columbiana 3個月後可形成菌根 37 圖 14.白背芒接種Glomus clarum 3個月後可形成菌根 37 圖 15. 南横 (左) 與大油坑 (右) 種源白背芒在大油坑土壤發芽率比較 38 圖 16. 白背芒於距離大油坑噴氣口100m土壤4種不同處理10個月後植株外觀 39 圖 17. 大頭茶於距離大油坑噴氣口20m土壤進行不同菌根菌接種處理7個月後之生長比較 41 圖 18. 植物磷酸鹽轉運蛋白之親緣關係圖 62 圖 19. 白背芒植物磷酸轉運蛋白基因及內參基因經real-time PCR增幅反應後產物之熔點曲線圖 63 圖 20. 白背芒不同菌根菌接種處理10個月後根部磷酸鹽轉運蛋白基因相對表現 6