Effets inhibiteurs des membres anti-apoptotiques de la famille de Bcl-2 sur l’activité de p53

During apoptosis, p53 translocates to the mitochondria where it exerts a pro-apoptotic function by acting analogously to activating BH3-only proteins. Mitochondrial p53 interacts with Bak, a Bcl-2 family member, leading to its oligomerization and the subsequent release of the mitochondrial effectors of apoptosis, such as cytochrome c, from the intermembrane space into the cytoplasm. The Bcl-2 family comprises three classes of proteins, including the anti-apoptotic members: Bcl-2, Bcl-xl, Mcl-1, Bfl-1/A1 et Bcl-w. These members are frequently overexpressed in cancer, reinforcing the resistance of cancer cells to therapeutic treatments. The aim of this thesis is to analyse the way by which the anti-apoptotic members of Bcl-2 family affect the pro-apoptotic activity of p53 at the mitochondria. At first, we examine the interactions between the anti-apoptotic members and the tumor suppressor. In this study we confirm that Bcl-2 interacts with p53. We also report that p53 directly interacts with Bcl-xl, Bfl-1 and Bcl-w. We then made experiments to determine which anti-apoptotic members are able to inhibit p53-dependent apoptosis. Cells overexpressing Bcl-2, Bfl-1 and Bcl-w were submitted to stresses known to trigger p53-dependent apoptosis. We found that Bcl-2 and Bfl-1 expression protects the cells from these factors whereas Bcl-w does not offer any significant protection. Kinetics of mitochondrial translocation of p53 after UVB exposure showed that overexpression of Bcl-2 and Bfl-1 enhances the mitochondrial and cytosolic translocation of p53, although they inhibit p53-dependent cell death.Le suppresseur de tumeur p53 peut provoquer l'entrée en apoptose directement au niveau des mitochondries. En effet, il interagit avec Bak, un membre pro-apoptotique de la famille de Bcl-2 présent constitutivement à la membrane mitochondriale externe. En induisant un changement de conformation de Bak, p53 provoque son oligomérisation. Cela résulte en la formation de pores dans la membrane mitochondriale externe et la libération des effecteurs mitochondriaux de l'apoptose. La famille de Bcl-2 est constituée de trois classes de protéines, dont les membres anti-apoptotiques: Bcl-2, Bcl-xl, Mcl-1, Bfl-1/A1 et Bcl-w. Ces protéines sont fréquemment surexprimées dans le cancer, ce qui renforce la résistance des cellules aux traitements thérapeutiques. Le but de cette thèse est d'analyser la façon dont les membres anti-apoptotiques de la famille de Bcl-2 affectent l'activité pro-apoptotique de p53. Pour cela, les interactions protéiques entre les différents membres anti-apoptotiques de la famille Bcl-2 et le suppresseur de tumeur p53 ont été examinées. Parmi ces protéines, nous avons mis en évidence des interactions entre Bcl-2, Bcl-xl, Bfl-1 et Bcl-w d’une part, et p53 d’autre part. Après avoir établi ces interactions, de nouvelles expériences réalisées ont permis d’identifier des membres anti-apoptotiques de la famille de Bcl-2 capables d’inhiber l’apoptose dépendante de p53. Des cellules surexprimant les membres Bcl-2, Bfl-1 et Bcl-w ont été soumises à des stress connus pour induire l’apoptose dépendante de p53. Nous avons établi que Bcl-2 et Bfl-1 protégeaient significativement la cellule contre ces facteurs tandis que Bcl-w n’octroyait aucune protection significative. La réalisation de cinétiques de translocation mitochondriale de p53 suite à une exposition aux UV-B a montré que la surexpression de Bcl-2 et Bfl-1 augmente la translocation mitochondriale et cytosolique de p53 tout en inhibant le processus apoptotique dépendant de p53.(SC - Sciences) -- UCL, 201