Caracterização clonal de linhagens celulares de câncer de mama e sua implicação em modelos experimentais para estudos in vitro

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2020.O câncer é denominado como um conjunto amplo de doenças que tem características em comum, como a desdiferenciação celular, a capacidade de secreção de fatores que provocam angiogênese, a presença de imortalização celular, e a capacidade de invasão e mestástase. Os cânceres são compostos por populações clonais com variações fenotípicas, o que fazem estas patologias serem extremamente heterogêneas. O câncer de mama é o tipo de cancro que mais acomete mulheres ao redor mundo, e tem números de incidência muito expressivos no Brasil. A MDA-MB-231 e a MCF-7 são duas linhagens celulares de câncer mamário muito utilizadas no meio científico. Desta forma, estudar as subpopulações destas linhagens e os fatores ambientais usados na rotina do cultivo celular que podem interferir na composição destas subpopulações é de muita relevância para o meio científico. Este estudo expôs as linhagens de adenocarcinoma mamário MDA-MB-231 e MCF-7 à técnica de seleção clonal, com o intuito de isolar linhagens monoclonais vindas delas e fazer comparações para entender qual a dinâmica biológica destas linhagens monoclonais, além de fazer comparações destes clones com as linhagens originárias, e entender como intervenções laboratoriais rotineiras podem mudar a composição fenotípica de linhagens usadas em cultivo celular. A MCF-7 não demonstrou resposta à técnica de seleção clonal, entretanto, foi útil ao estudo, pois juntamente com testes feitos com a MDA-MB-231 foi evidenciado que o tempo de cultivo é um fator de mudança fenotípica em linhagens policlonais. Os clones vindos de MDAMB-231 mostraram características particulares, além de demonstrarem que até em linhagens monoclonais o tempo de cultivo contribui para a geração de subpopulações, e que a resposta à quimioterapia convencional pode variar a depender da linhagem clonal, o que traz à tona a questão de que as respostas aos fármacos quimioterápicos podem variar até dentro de uma mesma linhagem celular. O fenômeno de mudança fenotípica é constante em linhagens celulares quando cultivadas em laboratório, sendo este fenômeno influenciado pelo tempo de cultivo e por outras interferências laboratoriais rotineiras.Cancer is called a broad set of diseases that have characteristics in common, such as cell de-differentiation, the ability to secrete factors that cause angiogenesis, the presence of cell immortalization, and the capacity for invasion and metastasis. Cancers are composed of clonal populations with phenotypic variations, which makes these pathologies extremely heterogeneous. Breast cancer is the type of cancer that most affects women around the world, and it has very significant incidence numbers in Brazil. MDA-MB-231 and MCF-7 are two breast cancer cell lines that are widely used in the scientific community, thus studying the subpopulations of these strains, and the environmental factors used in the cell culture routine that can interfere in the composition of these subpopulations is very relevant to the scientific environment. This study exposed the MDA-MB-231 and MCF-7 strains to the clonal selection technique, in order to isolate monoclonal strains from them and make comparisons to understand the biological dynamics of these monoclonal strains, in addition to making comparisons of these clones with the native strains, and understand how routine laboratory interventions can change the phenotypic composition of strains used in cell culture. The MCF-7 did not demonstrate sensitivity to the clonal selection technique, however, it was useful to the study, because together with tests done with the MDA-MB-231 it was evidenced that the cultivation timeis a factor of phenotypic change in polyclonal strains. The clones coming from MDA-MB- 231 showed particular characteristics, in addition to demonstrating that even in monoclonal lines the cultivation time contributes to the generation of subpopulations, and that the response to conventional chemotherapy can vary depending on the clonal line, which brings the question that responses to chemotherapy drugs may vary even within the same cell line. The phenotypic change phenomenon is constant in cell lines when grown in the laboratory, and this phenomenon is influenced by the time of cultivation and other routine laboratory interferences