Isolation and identification of biosurfactant producing yeasts from soil contaminated with petroleum hydrocarbons

Biyosürfaktanlar, bakteri, maya ve funguslar tarafından sentezlenen yüzey aktif moleküllerdir. Düşük toksisite, yüksek biyolojik bozunabilirlik, daha yüksek köpürme kapasitesi ve aşırı sıcaklıklarda, pH seviyelerinde ve tuzlulukta yüksek aktivite gibi dikkat çekici özelliklerinden dolayı, kimyasal olarak üretilen hemcinslerine kıyasla belirgin üstünlükleri vardır. Son yıllarda biyosürfaktanlar ile yapılan çalışmaların artışı kimyasal sürfaktanların yerine kullanılma potansiyelini de arttırmaktadır. Çalışmamızda petrol hidrokarbonlarıyla kontamine olmuş 8 farklı toprak örneğinden 64 adet maya izole edilmiştir. Bu izolatların tamamı 3 farklı tarama yöntemine (Parafilm M, Oil Spreading ve Drop collapse) tabi tutulmuştur ve en az ikisinde pozitif sonuç veren 20 maya izolatı biyosürfaktan üreticisi olarak belirlenmiştir. Daha sonra bu izolatların Du- Nouy halka yöntemi ile yüzey gerilimleri ölçülmüştür. Negatif kontrol olan suyun yüzey gerilimi 70,2 mN/m iken, pozitif kontrol olan %1 lik SDS'in yüzey gerilimi 37.9 mN/m çıkmıştır. Ölçümler sonucunda 20 örneğinde yüzey gerilimini düşürdüğü belirlenmiştir. En iyi sonucu 34.7 mN/m, 35.3 mN/m, 37.8 mN/m değerleriyle sırasıyla GS33, OS16, GS22 numaralı izolatlar göstermiştir. Biyosürfaktan üreticisi olarak belirlenen izolatların genotipik olarak tanılaması 5,8 ITS-PCR ve 26S rDNA PCR ile yapılmıştır. Her iki dizi analizi sonucunda, 6 tanesi Yarrowia lipolytica, 3 tanesi Candida tropicalis, 3 tanesi Trichosporon loubieri, 2 tanesi Geotrichum candidum, 2 tanesi Rhodotorula mucilaginosa, 1 tanesi Galactomyces geotrichum, 1 tanesi Rhodotorula sp, 1 tanesi Sporobolomyces lactosus tanılanmıştır. 26S rDNA sekans analizi ile Candida davisiana olarak tanılanan maya straini, ITS bölgesinin sekans analizine göre ise Sporobolomyces lactosus olarak tanılanmıştır.Biosurfactants are surface active molecules synthesized by bacteria, yeast and fungi. Biosurfactants have distinct advantages over chemically produced family due to their low toxicity, high biodegradability, higher foaming capacity and remarkable properties such as high activity at pH levels and salinity at extreme temperatures. In recent years, the increase in work done with biosurfactants has also increased the potential to replace chemical surfactants. All of these isolates were subjected to 3 different screening methods (Parafilm M, Oil Spreading and Drop collapse) and were identified as 20 yeast isolate biosurfactants producing at least two positive results. Subsequently, the surface tension of these isolates was measured by the Du-Nouy ring method. The surface tension of the negative control water was 70.2 mN / m, whereas the surface tension of the positive control SDS of 1% was 37.9 mN / m. As a result of the measurements, it was determined that the surface tension was decreased in 20 samples. The best results showed isolates GS33, OS16, GS22 with 34.7 mN/m, 35.3 mN/m and 37.8 mN/m, respectively. Genotypic identification of biosurfactant isolates was done by 5,8 ITS-PCR and 26S rDNA PCR.As a result of both sequence analyzes, 6 Yarrowia lipolytica, 3 Candida tropicalis, 3 Trichosporon loubieri, 2 Geotrichum candidum, 2 Rhodotorula mucilaginosa, 1 Galactomyces geotrichum, 1 Rhodotorula sp, 1 Sporobolomyces lactosus are diagnosed. Yeast strain identified as Candida davisiana by 26S rDNA sequence analysis was identified as Sporobolomyces lactosus according to sequence analysis of ITS region