Protein profile of the seminal plasma of pantaneiro bulls and their relation with semen freezability

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2013.O bovino Pantaneiro é uma raça localmente adaptada que se desenvolveu no bioma Pantanal brasileiro ao longo de quase 500 anos sob pressão de seleção natural. Estudos acerca de animais localmente adaptados são essenciais para nortear as ações dos programas de conservação de recursos genéticos animais. Assim, o objetivo deste trabalho foi correlacionar o perfil eletroforético bidimensional das proteínas do plasma seminal com a congelabilidade do sêmen de touros Pantaneiros. Utilizou-se ejaculados de dezoito touros Pantaneiros, divididos em dois grupos: de melhor e de pior congelabilidade. As amostras de sêmen pré- criopreservação foram avaliadas quanto à motilidade, vigor e morfologia espermática e as amostras de sêmen pós-criopreservação, avaliadas quanto à cinética pelo CASA, morfologia, integridade de membrana e acrossoma. As amostras de plasma seminal foram obtidas por centrifugação do sêmen e as proteínas seminais separadas por meio de eletroforese bidimensional em géis de poliacrilamida (SDS-PAGE), corados com Coomassie coloidal G- 250 e analisados por meio do aplicativo PDQuest™. Foram detectados 277 spots nos mapas bidimensionais do plasma seminal de reprodutores Pantaneiros. Nove spots apresentaram associações consistentes e significativas com os parâmetros seminais pós-criopreservação. Destes spots, cinco apresentaram diferença (P<0,05) entre os grupos de melhor e pior congelabilidade do sêmen. A análise multivariada apontou cinco spots correlacionados positivamente com os parâmetros de boa congelabilidade do sêmen. Houve diferenças no perfil proteico do plasma seminal entre os reprodutores de melhor e de pior congelabilidade do sêmen e a análise dos géis revelou uma heterogeneidade nos perfis individuais. Devido à associação dos spots 8305, 9217, 2603, 3514 e 2227 a proteínas encontradas em amostras de sêmen de alta congelabilidade e também relacionadas a eventos benéficos sobre as funções espermáticas, sugere-se que a presença dos mesmos está ligada à melhor congelabilidade do sêmen de touros Pantaneiros. ________________________________________________________________________________ ABSTRACTThe Pantaneiro cattle is a locally adapted breed that has been developed in the brazilian Pantanal biome over almost 500 years under the pressure of natural selection. Studies on locally adapted breeds are essential to guide the actions of the programs for conservation of animal genetic resources. The aim of this study was to correlate the two-dimensional electrophoretic profile of seminal plasma proteins with semen freezability from Pantaneiro bulls. We used ejaculates from eighteen Pantaneiro bulls divided into two groups: best and worst freezability. The sperm parameters motility, viability and morphology were evaluated before cryopreservation and also were evaluated after cryopreservation and further were evaluated CASA kinetics, integrity membrane and acrosome. Seminal plasma samples were obtained by semen centrifugation and seminal proteins were separated by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The gels were stained with colloidal Coomassie G-250 and analyzed using the PDQuest™. Were detected 277 spots in two-dimensional maps of the seminal plasma of Pantaneiro bulls. Nine spots showed consistent and significant associations with semen parameters after cryopreservation. Five these spots showed differences (P