Caracterização do transcritoma parcial do fungo patogênico Fonsecaea pedrosoi

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2011.Fonsecaea pedrosoi é um fungo dimórfico, caracterizado pelas formas aprofítica/reprodutiva (micélio/conídio) e infecciosa (corpos escleróticos), pertencente à família Dematiceae. Habita o solo, plantas e matéria orgânica em decomposição. Encontra-se em todos os continentes, mais comumente em regiões tropicais e subtropicais da América, Ásia e África. F. pedrosoi é o principal agente etiológico da cromoblastomicose, uma doença infecciosa crônica da pele e do tecido subcutâneo. No Brasil, essa doença é endêmica na região Amazônica. A infecção ocorre por implantação traumática transcutânea de conídios e fragmentos de hifa do fungo, acometendo principalmente trabalhadores rurais. Poucos são os dados a respeito da biologia molecular de F. pedrosoi disponíveis na literatura científica. Informações a respeito da expressão gênica são essenciais à compreensão do mecanismo de interação patógeno-hospedeiro e para o desenho de novas estratégias terapêuticas e de drogas específicas. Nesse sentido, o objetivo do presente trabalho foi a construção de uma biblioteca de cDNA de F. pedrosoi, seguido do sequenciamento de clones de cDNA dessa biblioteca e da respectiva geração de um banco de sequências expressas (ESTs, Expressed Sequence Tags). Dentre 480 ESTs analisadas, empregando ferramentas convencionais de bioinformática (pipeline disponível on-line: http://helix.biomol.unb.br/phph/index.html), 353 sequências de nucleotídeos distintas foram selecionadas segundo os parâmetros específicos estabelecidos (QV > 20 e extensão > 100 bases). Destas, 139 sequências apresentaram similaridade com sequências depositadas em banco de dados, dentre as quais destacam-se genes de transportadores de íons, transportadores de drogas, enzimas envolvidas na respiração celular, proteínas de parede celular e proteínas de choque térmico. ______________________________________________________________________________ ABSTRACTFonsecaea pedrosoi is a dimorphic fungus, characterized by saprophytic/reproductive (mycelium/conidia) and infectious forms (sclerotic bodies) belonging to the family Dematiceae. Inhabits soil, plants and decaying organic matter. It is found in all continents, most commonly in tropical and subtropical America, Asia and Africa. F. pedrosoi is the major etiologic agent of chromoblastomycosis, a chronic infectious disease of the skin and subcutaneous tissue. In Brazil, this disease is endemic in the Amazon region. Infection occurs by traumatic transcutaneous implantation of conidia and hyphae fragments of the fungus, affecting mainly rural workers. There are few data regarding the molecular biology of F. pedrosoi available in scientific literature. Information on the gene expression is essential to understanding the mechanism of host-pathogen interaction and for designing new therapeutic strategies and specific drugs. Thus, the purpose of this study was to construct a cDNA library of F. pedrosoi, followed by sequencing of cDNA clones in this library and the generation of a database of expressed sequence tags (ESTs). Of 480 ESTs analyzed, using conventional tools of bioinformatics (pipeline available online: http://helix.biomol.unb.br/phph/index.html), 353 distinct nucleotide sequences were selected according to specific parameters established (QV > 20 and length > 100 bases). Of these, 139 sequences showed similarity to sequences stored in databases, among which stand out genes of ion transporters, drug transporters, enzymes involved in cellular respiration, cell wall proteins and heat shock proteins