Effects of pentoxifylline on the in vitro viability of equine spermatozoids, after cooling at 5ºC

O objetivo deste trabalho foi avaliar, in vitro, o efeito da adição de 1 mg pentoxifilina por mL de amostras seminais diluídas em meio Kenney, e resfriadas a 5º C, de garanhões normospérmicos, sobre os seguintes parâmetros: taxas de motilidade total e motilidade progressiva, velocidade espermática ao longo da trajetória real, índice retilíneo, taxa de linearidade, velocidade progressiva, taxa de viabilidade e taxa de integridade da membrana plasmática. Foram avaliados 20 ejaculados de quatro garanhões, com o auxílio do Hamilton Thorn Research (Animal Version 12.0 L, EUA), em câmara de Makler. A taxa de viabilidade foi realizada por coloração de eosina e microscopia de contraste e a taxa de integridade de membrana, por coloração com fluorocromos, iodeto de propídio e diacetato de carboxifluoresceina e microscopia de fluorescência. As análises foram realizadas aos 30, 60, e 120 minutos de incubação a 37º C, após 12, 24 e 48 horas de resfriamento a 5ºC. A pentoxifilina incrementou significativamente, em relação ao grupo controle, os parâmetros espermáticos relacionados à motilidade dos espermatozóides e de integridade da membrana plasmática, durante todo o período de incubação, da seguinte forma: taxa de motilidade total em 8,2%; motilidade progressiva em 4,7%; velocidade real em 23,1 mm/s; taxa de espermatozóides com velocidade rápida em 7,4%; taxa de viabilidade em 4,7%; e integridade da membrana plasmática em 3,5 % do tratado. Quanto aos parâmetros índice de retilinidade e linearidade, não foi observada diferença significativa entre os grupos. Os resultados obtidos nas condições deste experimento indicam que a adição de pentoxifilina ao ejaculado resfriado de garanhões, até 48 horas após o resfriamento, pode ser benéfica à qualidade dos espermatozóides para uso na inseminação artificial.The objective of this work was to evaluate the in vitro effect of the addition of 1 mg pentoxifylline per ml of seminal samples from normospermic stallions, which were first diluted in Kenney extender and cooled at 5ºC. The evaluation was carried out using the following parameters: total and progressive motility rate, track speed, straightness and linearity rate, progressive velocity, viability rate and plasmatic membrane integrity rate. For this experiment, 20 ejaculates from four stallions were examined using Hamilton Thorn Research (Animal Version 12.0 L, EUA) with a Makler camera. The viability rates were obtained using eosin dyes under a light microscope and membrane integrity was obtained by fluorochrom, propidium iodine and carboxyfluorescein diacetat dyes under a fluorescence microscope. The semen examination occurred at 30, 60 and 120 minutes of incubation at 37º C, after 12, 24 and 48 hours of cooling at 5ºC. The pentoxifylline significantly increased the sperm parameter rates of motility and plasmatic membrane integrity for all incubation times, when compared with the control group. The rates were: +8.2% total motility, +4.7% progressive motility, +23.1 mm/s track speed, +7.4% progressive velocity, +4.7% viability and +3.5% plasma membrane integrity. The straightness and linearity rates were not significantly different between the control and treated groups. The experimental data confirm that pentoxifylline addition to stallion-cooled sperm, up to 48 hours after cooling, could preserve sperm quality for artificial insemination