Two-dimensional characterization of ovine seminal plasma proteins as subsidy to increase the effectiveness of the artificial insemination with frozen semen

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009.O objetivo deste trabalho foi identificar e caracterizar o perfil protéico do plasma seminal ovino por meio de eletroforese bidimensional em géis de poliacrilamida (2D-PAGE) e verificar se alguma dessas proteínas está relacionada com a congelabilidade do sêmen, podendo ser utilizadas como marcadores para essa característica. Foram utilizados os ejaculados de cinco reprodutores, nos quais foram realizadas avaliações espermáticas e dos quais os plasmas seminais obtidos por centrifugação foram submetidos 2D-PAGE em gel a 12% de poliacrilamida. Foram identificados 92 spots, considerando todos os animais analisados. Destes, 41 (44,57%) foram identificados em todos os animais e 51 (55,43%) expressaram-se diferencialmente entre eles. Dentre as proteínas que se expressaram diferentemente, as proteínas 03 (7,9 kDa), 23 (13,6 kDa) e 31 (21,4 kDa) se destacaram, por apresentarem maior expressão e relações com as características espermáticas dos animais. A proteína 31 foi encontrada somente no animal 05 e apresentou alta expressão no mesmo. Esse animal apresentou os menores valores de integridade de membrana e espermatozóides vivos íntegros; e alto valor de espermatozóides mortos reagidos no sêmen descongelado. Já as proteínas 03 e 23 foram encontradas somente no animal 21 e se destacaram devido à alta expressão nesse animal, que apresentou a maior média de integridade de membrana no sêmen descongelado. A avaliação dos dados obtidos evidenciou variações significativas nos resultados das análises do sêmen dos animais e uma variabilidade no perfil protéico no plasma seminal dos carneiros, sugerindo as proteínas 03, 23 e 31 como possíveis marcadores da capacidade criopreservadora do sêmen. A proteína 31 como possível indicador da menor congelabilidade e as proteínas 03 e 23 como marcadores da maior congelabilidade do sêmen. _______________________________________________________________________________ ABSTRACTThe objective of this study was to identify and characterize the protein profile of ram seminal plasma using two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2D-PAGE) and to verify if any of these proteins was associated with semen freezability, which could be used as markers for predicting semen freezability. Semen from five rams were used. The sperm analysis was held and the seminal plasma obtained by centrifugation was submitted to 2DPAGE using 12% acrylamide gel. Ninety two spots were identified considering the analyzed animals. Forty one (44.57%) were found in all animals and 51 (55.43%) were differentially expressed among them. From that proteins differently expressed, the proteins 03 (7.9 kDa), 23 (13.6 kDa) and 31 (21.4 kDa) stood out because they showed higher expression and because of relations with the sperm characteristics of the animals. The protein 31 was found just in animal 05 and showed high expression in it. This animal had the worst values for live spermatozoa with intact acrosome and plasmatic membrane integrity; and high value for dead spermatozoa with reacted acrosome in thawed semen. Proteins 03 and 23 were found just in animal 21 and showed high expression in this animal, which presented the best values for plasmatic membrane integrity in thawed semen. The results showed a significant variation among sperm analysis of the animals and variability in the protein profile of the seminal plasma of the rams, suggesting that proteins 03, 23 and 31 are possible markers of semen freezability. Protein 31 predicting low semen freezability, and proteins 03 and 23 predicting high semen freezability