Diagnóstico citogenético e molecular das alterações genéticas recorrentes em leucemias da infância, no Distrito Federal

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2009.Em crianças, as leucemias, predominantemente do tipo aguda, são a forma mais comum de câncer. Informações a respeito das alterações genéticas recorrentes são importantes para a confirmação diagnóstica, caracterização biológica e apresentam grande valor prognóstico nas leucemias. No entanto, no Distrito Federal, não há relatos a respeito de suas freqüências. Utilizando-se as técnicas de obtenção de metáfases a partir do cultivo de células de medula óssea e RT-PCR foram pesquisadas as alterações genéticas recorrentes em 133 pacientes pediátricos portadores de leucemia, no período de 2005 a 2007, correspondendo a 78,70% do total registrado no Hospital de Apoio de Brasília. Observaram-se um total de 88 casos de LLA de linhagem B, 34 de LMA, sete de leucemia aguda bifenotípica e quatro de LMC, correspondendo, respectivamente, a 66,17%, 25,56%, 5,26% e 3,01% do total analisado. Entre os 79 casos com análise cariotípica completa, 47 apresentaram cariótipo normal e 32 outros evidenciaram alterações cromossômicas, sendo: hiperdiploidia (12), hipodiploidia (7), pseudodiploidia (12) e trissomia do 21 (1). Transcritos híbridos recorrentes foram identificados em 17 casos de LLA de linhagem B, sendo BCR/ABL p190 (1), E2A/PBX1 (5), TEL/AML1 (10) e MLL/ENLA1 (1) e em onze de LMA: AML1/ETO (5), PML/RAR (3), CBF /MYH11 (3). Para os transcritos: MLL/AF4, MLL/AF9, MLL/ENLA2 e MLL/ELL, nenhuma amplificação foi observada. Para cada transcrito foi verificada variação no valor das freqüências obtidas ano a ano. Questões relacionadas à heterogeneidade étnica são discutidas, sugerindo-se influência deste fator na variação encontrada. Os valores referentes às freqüências do transcrito TEL/AML1 identificados, no presente trabalho, são inferiores à média de 25% relatada em países industrializados. Análise comparativa da freqüência do referido transcrito é realizada entre países com diferentes graus de industrialização, identificando-se possível correlação entre este fator e a freqüência de TEL/AML1, o que leva a considerar a possibilidade de ocorrência de uma etiologia infecciosa para a leucemia infantil. Não houve concordância entre os resultados obtidos a partir das análises citogenética e molecular. A análise molecular, por RT-PCR, foi considerada como técnica ideal para a detecção de transcritos híbridos, enquanto que a análise citogenética contribuiu para a identificação de alterações cromossômicas numéricas, alterações estruturais não recorrentes e pseudodiploidias sem transcrito correspondente. O trabalho realizado permitiu a instalação de uma Unidade de Diagnóstico Molecular de Leucemias no Distrito Federal, ao possibilitar a incorporação do exame molecular no grupo de exames realizados ao diagnóstico em todos os pacientes com suspeita de leucemia, registrados no Hospital de Apoio de Brasília. _______________________________________________________________________________ ABSTRACTLeukemias, mainly of the acute type, are the most common form of cancer in children. Information about recurrent genetic alterations is important for diagnostic confirmation and biological characterization, and this represents great prognostic value in leukemias. However, in the Federal District there are no reports on their frequency. Using techniques that obtain metaphases from the cultivation of bone marrow cells and RT-PCR, recurrent genetic alterations were studied in 130 pediatric leukemia patients, from 2005 to 2007, corresponding to 78,70% of the total number recorded at the Hospital de Apoio of Brasília. A total of 88 cases of LLA of B lineage, 34 of LMA, seven of acute biphenotypic leukemia and four of LMC were observed, corresponding, respectively, to 66.17%, 25.56%, 5.26% and 3.01% of the whole group analyzed. Among the 79 cases with complete karyotypic analysis, 47 presented a normal karyotype and 31 others showed chromosomal alterations, which were divided thus: hyperdiploidy (12), hypodiploidy (7), pseudodiploidy (12) and trisomy-21 (1). Recurrent hybrid transcripts were identified in 17 cases of LLA of B lineage, and these were BCR/ABL p190 (1), E2A/PBX1 (5), TEL/AML1 (10) and MLL/ENLA1 (1) and in eleven of LMA: AML1/ETO (5), PML/RAR (3), CBF /MYH11 (3). For transcripts MLL/AF4, MLL/AF9, MLL/ENLA2 and MLL/ELL, no amplification was observed. For each transcript there was a variation in the value of frequencies obtained year on year. Questions relating to ethnic heterogeneity are discussed, suggesting that this is a factor in the variation encountered. The values referring to frequencies in the TEL/AML1 transcripts identified in the current work are below the average of 25% reported in industrialized countries. Comparative analysis of the frequency of the transcript is carried out among countries with different levels of industrialization, identifying a possible correlation between this factor and the frequency of TEL/AML1, which leads one to consider the possibility of there being an infectious etiology for child leukemia. There was no match between the results obtained from cytogenetic and from molecular analyses. Molecular analysis, by RT-PCR, was considered to be the ideal technique to detect hybrid transcripts, while cytogenetic analysis helped to identify numerical chromosomal alterations, non-recurrent structural alterations and pseudodyploidies with no corresponding transcript. This work allowed a Molecular Leukemia Diagnosis Unit to be installed in the Federal District, making it possible for the molecular test to be incorporated in the group of tests carried out when diagnosing all patients with suspected leukemia, registered at the Hospital de Apoio of Brasília