Ovatoxines: Purification à partir d’Ostreopsis cf. ovata en culture et niveaux d’accumulation dans les produits de la mer

Dinoflagellates of genus Ostreopsis are known in tropical areas to provoke food intoxication, after palytoxin accumulation in seafood. Probably in link with climatic changes, Ostreopsis sp. is increasingly present in French Mediterranean since 2006. In the context of the PhD, the studies in natural environment, in summer 2011 and 2012, showed that: i) Ostreopsis cf. ovata strain presented a complex toxinic profile, including palytoxin and especially ovatoxins (OVTX-a, -b, c, -d, -e). A new analog (OVTX-h) was detected; ii) cell and toxinic concentrations decreased with depth; iii) different seafood accumulated toxins, which could represent real risk for bathers and consumers. Because there are no standards for OVTXs, one of the PhD goals was to develop a OVTXs purification protocol from Ostreopsis cf. ovata extracts. For this purpose, optimal culture conditions were investigated, allowing a maximal production of OVTXs (300 pg/cell). Different extraction and concentration steps developed had permitted to obtain a toxin rich fraction. Finale purification was performed using liquid chromatography/mass spectrometry/ UV detection, using Uptisphere C18-TF column. PhD researches have allowed to acquire data, which contribute to analysis of sanitary impact, since nowadays, at international level, there are just few data allowing to establish Ostreopsis sp. alert and sanitary security threshold.Les dinoflagellés du genre Ostreopsis sont connus dans les zones tropicales pour être à l’origine d’intoxications alimentaires, suite à l’accumulation de palytoxine dans les produits de la mer. Probablement en lien avec le changement climatique, Ostreopsis sp. est de plus en plus présent depuis 2006 en Méditerranée française. Dans le cadre de la thèse, les études terrain effectuées durant les étés 2011 et 2012, ont montré que : i) les souches d’Ostreopsis cf. ovata présentent un profil toxinique complexe composé de la palytoxine et surtout 90 % d’ovatoxines (OVTX-a, -b, -c, -d, -e). Un nouvel analogue (OVTX-h) a également été détecté ; ii) les concentrations cellulaires et toxiniques d’O. ovata diminuent avec la profondeur ; iii) différents produits de la mer accumulent les toxines, pouvant présenter un risque réel pour les baigneurs et les consommateurs. Comme il n’existe pas d’étalon d’OVTXs, un des objectifs de la thèse a porté sur le développement d’une procédure de leur purification à partir des extraits d’O. ovata. Pour cela, des conditions optimales de culture ont été recherchées permettant une production maximale d’OVTXs (300 pg/cellule). Les différentes étapes d’extraction et de concentration développées ont permis d’obtenir une fraction très riche en toxines. La purification finale a été menée par chromatographie liquide/ spectrométrie de masse/détection UV en utilisant une colonne Uptisphere C18-TF. Les travaux de thèse ont permis d’acquérir des données qui vont contribuer à l’analyse de l’impact sanitaire puisque actuellement, au niveau international, il existe très peu de données permettant d’établir des seuils d’alerte d’Ostreopsis sp. et de sécurité sanitaire