Der Einfluss von Zytokinen, Anti-HBs-spezifischen T-Zellen und Anti-HBs auf Hepatitis B produzierende Zellen: Beobachtungen an einem Zellkultursystem als Model der chronischen Hepatitis B

Zur Erforschung der chronischen Hepatitis B-Infektion werden oftmals stabil mit dem HB-Virus infizierte Zellkulturen verwendet. Es stellt sich aber die Frage, ob dieses in - vitro Modell ein Ersatz für eine in - vivo Infektion darstellen kann. Ausgehend von dieser Fragestellung erfolgte die Betrachtung der durch die Versuche mit Hep G 2.2.15 Zellen erhaltenen Ergebnisse. Zu Beginn der Arbeit stand die Aufgabe der Charakterisierung der Hepatomzelllinie Hep G 2.2.15 durch quantitative Bestimmung der produzierten HBV-Komponenten über einen bestimmten Zeitraum. Zu diesem Zweck wurde neben der am Institut vorhandenen Hep G 2.2.15 Zelllinie zusätzlich auf eine Hep G 2.2.15-Zellkultur aus einem weiteren Labor zurückgegriffen. Es konnte festgestellt werden, dass es zwar zu einem kontinuierlichen Anstieg – linear aber auch exponentiell – bei den HBVProteinen kam, sich diese Kulturen jedoch, was die Quantität an HBsAg und HBeAg anging, stark unterschieden. Im Gegensatz dazu blieb die gemessene DNA-Kopienzahl über die Untersuchungsdauer hinweg für beide Kulturen relativ konstant. Im Anschluss wurde der Einfluss rekombinanter humaner Zytokine, TNF α und IFN ɣ, in unterschiedlichen Konzentrationen und unter Modifikation der Versuchsbedingungen (Kulturdauer, Zeitpunkt der Zytokinzugabe, Zeitpunkt der Überstandsabnahme, Zellkulturlinie) untersucht. Dabei konnte nicht in allen Versuchsreihen eine Auswirkung auf die Produktion von HBsAg und HBeAg detektiert werden. Eine nachweisbare Wirksamkeit auf die HBV-DNA konnte, trotz geringer Schwankungen in der Kopienzahl, nicht gezeigt werden. Dieses Ergebnis steht im Widerspruch zu Ergebnissen in anderen Arbeiten, welche durchgängig, teilweise unter sehr ähnlichen Bedingungen, einen Effekt der beiden Zytokine nachweisen konnten. Nach diesen Ergebnissen durch Zugabe technisch hergestellter Agentien, wurde der Effekt durch von naiven und spezifischen PBMC sezernierten Zytokinen getestet, die, durch eine semipermeablen Membran getrennt, in Kokultur mit einem Hep G 2.2.15 –Zellrasen kultiviert wurden. Dabei konnte sowohl für die PBMC geimpfter als auch ungeimpfter Spender eine ähnlich starke Reduktion von HBsAg und HBeAg im Vergleich zur Negativkontrolle nachgewiesen werden. Die Verringerung der Produktion lag in etwa jeweils bei 50 %. Eine Auswirkung auf die HBV-DNA war wiederum nicht nachweisbar. Zur Klärung des Einflusses unterschiedlicher Antikörper (humanes IgG, poly- und monoklonales Anti-HBs) wurden, wie bereits auch in den anderen Versuchsreihen, unterschiedliche Konzentrationen dieser Agentien dem Medium beigefügt und kokultiviert mit dem Resultat, dass sowohl das humane IgG als auch der polyklonale Antikörper eine Reduktion der HBeAg-Menge erreichen konnten. Nur in höheren Verdünnungen konnte das polyklonale Anti-HBs das HBeAg stärker verringern, bei geringeren Verdünnungen ließ sich ein spezifischer Effekt des HBIG feststellen. Die Unterschiede in der Handhabung der Zellkulturen, sowohl zwischen verschiedenen Zelllinien als auch zwischen den Kulturen gleicher Zelllinien, die schwankenden Ergebnisse von Versuchsreihen unter gleichen Rahmenbedingungen, sowie die unzureichende Reproduzierbarkeit von Ergebnissen anderer Arbeitsgruppen, stellen in dieser Arbeit gefundene Gründe dar, weshalb sich durchaus noch eingehender mit der Frage beschäftigt werden sollte, inwiefern das Modell der Hep G 2.2.15 als in vitro Modell für eine chronische HB-Virus-Infektion stehen kann