Droplet-based microfluidics and engineering of tissue plasminogen activator for biomedical applications

Le phage display est une méthode généralement utilisée pour l'évolution dirigée de protéines, elle permet de produire une immense diversité de variants de protéines exprimés sur la membrane de particules virales. Ces variants de protéines peuvent être sélectionnés soit pour leur affinité de liaison (p. ex. les anticorps) soit pour leur activité catalytique (p.ex. les enzymes). La sélection d'enzymes pour leur activité catalytique requiert néanmoins l'utilisation de substrats et/ou produits immobilisés, ce qui empêche la sélection de protéines sur plusieurs cycles catalytiques. Le but de ce projet de thèse était de développer une méthode nous permettant d'outrepasser ces limites : la compartimentation dans des systèmes microfluidiques de particules virales exprimant des variants de protéines unique sur leur surface. L'encapsulation de ces particules dans des gouttes nous a permit d'utiliser des substrats/produits solubles et donc la sélection pour de multiples cycles catalytiques a été possible. L'utilisation d'un système d'expression mammifère a permit aux protéines de subir les modifications post-traductionnelles (ponts disulfure, glycosylations) nécessaires. Ce système permet de monitorer l'activité enzymatique, de variants de protéines uniques d'une banque, exprimés sur la membrane de particules virales. En plus, nous avons développé un système nous permettant de trier des virus en utilisant comme critère la présence ou l'absence d'activité enzymatique.Phage display is a widely used method for directed evolution of proteins, allowing the generation of an enormous diversity of protein variants displayed on the viral particles (library diversity