3-Carboxy-4-methyl-5-propyl-2-furanpropionsäure als mögliche Ursache für falsch niedrig bestimmte Albuminwerte im Serum mittels der Bromkresolpurpurmethode bei Hämodialysepatienten

The aim of this study was to examine the applicability of the new dye-binding method BCP for haemodialysis patients and to investigate the influence of CMPF dye-binding methods. Albumin was determined in a group of HD patients (n=124) and a group of non-HD patients (n=101) by the dye-binding methods BCG and BCP and an immunological reference method. The results from the different methods within the two groups were compared with each other. The CMPF quantitation was done in accordance to a published method that was optimized for this study. The influence of other substances with high albumin binding affinity was also investigated by adding ascending concentrations of the drug of interest to plasma froma fasting proband with no medication. The albumin was then measured by the two dye-binding methods BCG and BCP and a nephelometric method. The albumin measurements by the new BCP method showed – in comparison to the BCG method – a wrong negative deviation for the albumin values up to 39,7% in the group of haemodialysis patients. The negative deviation was highest in hypoalbuminaemic samples and decreased proportionality with increased albumin concentrations. In the group of non-HD patients there was no wrong negative deviation for the albumin values by the BCP method in comparison to the BCG method. Especially in hypoalbuminaemic samples, an overestimation of albumin values was attested. The new BCP method showed in comparison to the immunological method an underestimation of albumin values in both groups. The albumin measurements by the BCG method showed – in comparison to the immunological method – an overstimation of albumin values in both groups, which was especially marked in hypoalbuminaemic samples. In a test series with CMPF-spiked plasma samples a wrong negative deviation of albumin values with increasing CMPF concentrations for the BCP method was observed, but it was not observed for the BCG method. This effect was most marked in hypoalbuminaemic samples. The quantitation of CMPF showed marked higher concentration of CMPF in average in the group of haemodialysis patients in comparison to the control group. Optimizing the originally published method for the quantitation of CMPF lead to a significant less sample volume of 100 µl and shorter analysis time. We succeded in inserting marked lower volumes now. The results of the method validation with intra-assay CVs between 4.3 % and 12.8 % throughout the entire measuring range and coefficients of correlation R2 between 0.9717 and 0.9990 for all of the calibration curves were satisfactorily. Even though our study showed no significant correlation between the plasma CMPF concentration and the deviation of albumin values by the BCP method, the test series with CMPF-spiked samples showed an increasing negative influence on the BCP albumin determination with increasing CMPF concentrations. Other drugs with high albumin binding affinity could be excluded as far as tested. Despite high financial costs, the immunological methods being the most reliable methods should be used for such a crucial laboratory value as albumin in therapy and running assessment of chronic renal insufficiency and haemodialysis. The CMPF concentration could be included in the decision making across the choice of suitable albumin determination methods for haemodialysis patients. In future studies there should be further research into the interactions between uremic toxins and other retention substances by the dye-binding methods to achieve a standardization in the albumin determination in case of haemodialysis patients.Ziel dieser Studie war es, die Anwendbarkeit der neuen BCP-Methode bei Hämodialysepatienten zu prüfen und den Einfluss der Furansäure CMPF auf chromogene Albuminbestimmungsmethoden zu untersuchen. Hierzu wurde das Albumin in einer Gruppe von Dialyspatienten (n=124) und einer nicht-dialysepflichtigen Kontrollgruppe (n=101) mit den beiden chromogenen Methoden BCG und BCP und einer immunologischen Referenzmethode bestimmt. Im Anschluss wurden die Ergebnisse zwischen den einzelnen Messmethoden und den beiden Gruppen miteinander verglichen. Die CMPF-Quantifizierung erfolgte mittels einer an die Methode von H. G. Wahl angelehnten und optimierten Methode. Um den Einfluss weiterer Störsubstanzen mit hohen Albuminbindungsaffinitäten auf die Albuminbestimmung zu untersuchen, wurde in einer Versuchsreihe das Plasma eines nüchternen Probanden mit unterschiedlichen Medikamenten und CMPF in aufsteigenden Konzentrationen versetzt und anschließend das Albumin mittels der BCG-, BCP- und einer nephelometrischen Methode vor und nach der Substanzzugabe bestimmt. Die Albuminmessungen mittels der neuen Advia Bromkresolpurpur-Methode (BCP) zeigten im Vergleich zur vorherigen Bromkresolgrün-Methode (BCG) in der Gruppe der Dialysepatienten einen negativen Bias für die Albuminwerte von bis zu 39,7%. Dieser war besonders in hypoalbuminämischen Proben ausgeprägt und verringerte sich proportional mit steigenden Albuminkonzentrationen. Im Gegensatz hierzu konnte in der Gruppe der Nicht-Dialysepatienten kein negativer Bias der BCP-Methode gegenüber der BCG-Methode nachgewiesen werden. Insbesondere in hypoalbuminämischen Proben war eine Überschätzung der Albuminwerte durch die BCP-Methode nachweisbar. Im Vergleich zwischen der BCP-Methode und der nephelometrischen ReferenzMethode zeigte sich sowohl in der Gruppe der Dialysepatienten, als auch in der Gruppe der Nicht-Dialysepatienten ein negativer Bias für die BCP-Methode. Für die BCG-Methode war im Vergleich zur immunologischen Referenzmethode insbesondere in hypoalbuminämischen Proben eine Überschätzung der Albuminwerte in beiden Patientengruppen nachweisbar. In der Versuchsreihe mit CMPF-gespikten Plasmaproben konnte insbesondere in hypoalbuminämischen Proben eine falsch-negative Abweichung der Albuminwerte mit steigendenden CMPF-Konzentrationen durch die BCP-Methode, nicht jedoch durch die BCG-Methode, beobachtet werden. Bei der CMPF-Quantifizierung wurden in der Gruppe der Dialysepatienten im Vergleich zur gesunden Kontrollgruppe durchschnittlich deutlich höhere Konzentrationen an CMPF nachgewiesen. Bei der Weiterentwicklung einer neuen Labormethode zur CMPF-Quantifizierung gelang es, deutlich geringere Volumina einzusetzen. Die Ergebnisse der Methoden-Validierung waren mit Variationskoeffizienten (Unpräzision in der Serie) zwischen 4,3 % und 12,8 % über den gesamten Messbereich und Korrelationskoeffizienten R2 zwischen 0,9717 und 0,9990 für alle Eichkurven zufriedenstellend. Auch wenn diese Studie keine Korrelation zwischen den Plasma-CMPF-Konzentrationen und dem negativen Bias der BCP-Methode herstellen konnte, zeigte die Versuchsreihe mit CMPF-gespikten Proben zumindest mit steigenden CMPF-Konzentrationen einen zunehmenden negativen Einfluss auf die BCP-Bestimmung. Darüber hinaus konnten Medikamente mit einer hohen Bindungsaffinität zu Albumin als Ursache für die falsch niedrig gemessenen Albuminwerte mittels der BCP-Methode bei Hämodialysepatienten weitestgehend ausgeschlossen werden. Trotz höherer finanzieller Kosten sollten immunologische Methoden als verlässlichste Methoden für einen solch wichtigen Laborwert wie Albumin in der Therapie und Verlaufsbeurteilung der chronischen Niereninsuffizienz und Hämodialyse eingesetzt werden. In die Entscheidungsfindung über die Auswahl der geeigneten Albuminbestimmungsmethode bei Hämodialysepatienten könnte man die CMPF-Konzentrationen mit einbeziehen. So wäre bei höheren CMPF-Konzentrationen eine immunologische Methode vorzuziehen, wohingegen bei niedrigen Werten eine Messung mittels der BCG-Methode vertretbar wäre. In Zukunft müssen jedoch weitere Untersuchungen über die Interaktionen zwischen Urämietoxinen und anderen Retentionssubstanzen mit den chromogenen Methoden durchgeführt werden, um eine Standardisierung der Albuminbestimmung bei Hämodialysepatienten zu erreichen