Diagnóstico molecular de especies de Candida y otras levaduras. Identificación de mutaciones en los genes ERG11, TAC1 y UPC2 en relación con la sensibilidad reducida a azoles, y equinocandinas en el gen FKS

212 p.En las últimas décadas ha habido un incremento significativo de las infecciones fúngicas en humanos debido a los avances médico quirúrgicos que han permitido la supervivencia de pacientes vulnerables. Los géneros Candida y Aspergillus ocupan el primer y segundo lugar, respectivamente, como causa de fungemia nosocomial. Candida albicans es la especie prevalente y, en combinación con Candida glabrata, Candida parapsilosis, Candida tropicalis y Candida krusei representa el 90% de las micosis invasoras. Además, hay un número creciente de especies fúngicas que, aprovechando las condiciones de inmunosupresión de los pacientes, causan infecciones menos comunes, pero con una alta tasa de mortalidad, destacando los géneros Cryptococcus, Pneumocystis, Fusarium, Scedosporium, Rhizopus, Mucor o Saprochaete entre otros. Por otro lado, el aumento de estas especies menos comunes ha ido acompañado de un aumento de aislamientos con sensibilidad reducida a los fármacos antifúngicos, capaces de producir infecciones de brecha. El inicio temprano del tratamiento adecuado es fundamental para la supervivencia de estos pacientes, sin embargo, las técnicas de diagnóstico empleadas suelen ser laboriosas y lentas en proporcionar resultados. En este sentido, la biología molecular ofrece herramientas sencillas y rápidas para la identificación del patógeno fúngico y para la evaluación de la sensibilidad del microorganismo a los compuestos antifúngicos. En este trabajo de tesis se ha desarrollado un ensayo de qPCR multiplex útil para la detección e identificación de las 6 especies más frecuentes del género Candida, el cual ha podido ser validado con muestras clínicas de origen oral y vulvovaginal. Asimismo, se han identificado en aislamientos de C. albicans resistentes a antifúngicos mutaciones en los genes ERG11, TAC1 y UPC2, relacionadas en la literatura con la sensibilidad reducida a azoles. Por otro lado, se ha desarrollado un segundo ensayo de PCR que ha permitido la identificación específica de Saprochaete capitata directamente de muestras de sangre y de muestras clínicas incluidas en parafina, y se ha identificado una sustitución natural en la primera base de la región Hot Spot 1 del gen FKS que podría ser responsable de la sensibilidad reducida a equinocandinas que posee esta especie fúngica de manera intrínseca. Los ensayos aquí presentados, aunque preliminares, suponen una herramienta prometedora para su empleo tanto en la identificación del agente etiológico causante de la infección fúngica