Determination of cholinesterase activity in human blood

Práce se zabývá stanovením aktivity cholinesteráz v lidské krvi. Cholinesterázy jsou enzymy, které přednostně hydrolyzují estery cholinu a plní řadu biologických funkcí. V krvi rozlišujeme dva různé typy cholinesteráz a to acetylcholinesterázu a butyrylcholinesterázu. Součástí této práce je stanovit aktivitu obou těchto enzymů ve vzorcích krve od dobrovolníků za pomocí spektrofotometrické Ellmanovy a titrační pH-statové metody. Součástí práce je i stanovení inhibiční účinnosti vybraných salicylanilidthiofosfátů vůči oběma cholinsterázám v lidské krvi. K tomu byla využita jak Ellmanova, tak pH-statová metoda. Dále byl také stanoven rozdělovací koeficient pro testované salicylanilidthiofosfáty v systému 1-oktanol:voda a na závěr byl určen i typ inhibice pro zvolený salicylanilidthiofosfátový inhibitor opět s využitím jak Ellmanovy, tak pH-statové metody. Získané experimentální výsledky z obou metod byly mezi sebou navzájem porovnány a byly zjištěny odlišnosti ve výsledných hodnotách. To může být způsobeno nejen rozdílnými metodami stanovení, ale i tím, že každá z metod detekovala jiný produkt.The work deals with the determination of cholinesterases activity in human blood. Cholinesterases are enzymes which preferentially hydrolyse choline esters and perform a variety of biological functions. There are two different types of cholinesterases in the blood acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase. A part of this work is to determine the activity of these two enzymes in blood samples from volunteers using spectrophotometric Ellman's method and pH-stat method. The work also includes determination of inhibitory potency of selected salicylanilide thiophosphates against both cholinesterases in human blood. For this purpose were used Ellman's and pH-stat methods. It was also determined the partition coefficient for all tested salicylanilide thiophosphates in system 1-octanol:water. Finally the type of inhibition for the selected salicylanilide thiophosphate inhibitor using Ellman's and pH-stat metods was also defined. Obtained experimental results from both methods were compared with each other and there were observed differences between resulting values. This may be caused not only by using different methods of measurement, but also a detection of another product.Katedra biologických a biochemických vědPrezentace výsledků diplomové práce.Diskuze k posudku vedoucího a oponenta diplomové práce. Studentka zodpověděla vaechny dotazy a připomínky k diplomové práci