Aplikace magnetického imunosorbentu v Ephesia čipu určeného pro cirkulující nádorové buňky

In this study, we describe a particular step in developing a microfluidic device for capture and detection of circulating tumor cells?specifically the preparation of an immunosorbent for implementation into the separation chip. We highlight some of the most important specifics connected with superparamegnetic microspheres for microfluidic purposes. Factors such as nonspecific adsorption on microfluidic channels, interactions with model cell lines, and tendency to aggregation were investigated. Poly(glycidyl methacrylate) microspheres with carboxyl groups were employed for this purpose. To address the aforementioned challenges, the microspheres were coated with hydrazide-PEG-hydrazide, and subsequently anti-epithelial cell adhesion molecule (EpCAM) antibody was immobilized. The prepared anti-EpCAM immunosorbent was pretested using model cell lines with differing EpCAM density (MCF7, SKBR3, A549, and Raji) in a batchwise arrangement. Finally, the entire system was implemented and studied in an Ephesia chip and an evaluation was performed by the MCF7 cell line.V této studii jsou dopodrobna popsány jednotlivé kroky vedoucí k vývoji magnetického imunosorbentu určeného k zachycení cirkulujících nádorových buněk v mikrofluidním zařízení. Jsou zde zdůrazněny nejvíce důležité specifikace spojené s výběrem superparamagnetických mikročástic pro mikrofluidní účely. Zejména byly studovány faktory jako nespecifická adsopce na mikrofluidní kanálky, interakce s modelovými buněčnými liniemi a tendencí k agregaci. Ve výzkumu byly použity poly(glycidyl methacrylát)ové mikročástice s karboxylovou funkční skupinou, které byly pokryty hydrazidovým PEGem (hydrazide-PEG-hydrazide) s nádledným navázáním monoklonální protilátky anti-EpCAM (anti-epithelial cell adhesion molecule). Takovýto imunosorbent byl testován nejprve ve vsádkovém uspořádání až poté byl implementován do mikrofluidního zařízení, nazvaného Ephesia čip, přičemž docházelo k interakci s testovanými buněčnými liniemi (MCF7, SKBR3, A549, and Raji) s různou husotou povrchového antigenu EpCAM