Aspectos fisiológicos, bioquímicos e microscópicos da interação arroz-Bipolaris oryzae mediados por um fungicida do grupo das estrobilurinas

Strobilurins are among the most important fungicides that are used for plant disease control worldwide. In addition to their fungicide effect, strobilurins can also affect some physiological and biochemical aspects of treated plants. Nonetheless physiological, biochemical and microscopic alterations caused by azoxystrobin (Az), the main marketed strobilurin, in rice crop remain elusive. To address this issue, detailed gas exchange measurements and chlorophyll a fluorescence analysis, antioxidant and defense systems assays as well light microscopy analysis were performed on rice plants (cultivar Metica-1) that were sprayed or non-sprayed with Az (+Fu and -Fu plants) and either challenged or not with Bipolaris oryzae, the causal agent of brown spot. The +Fu non-inoculated plants displayed lower carbon (C) fixation than -Fu plants, and such decrease was not related to photochemical or biochemical limitations but rather to decreased stomatal conductance that limited the CO 2 influx into the mesophyll cells. The photosynthesis of -Fu plants decreased upon B. oryzae infection, which was chiefly governed by photochemical and biochemical limitations. The energy surplus that was caused by limited C fixation in the +Fu inoculated plants was thermally and effectively dissipated until 72 hours after inoculation (hai). For the -Fu plants, however, this mechanism was not sufficient to prevent chronic photoinhibition to photosynthesis. The inoculated plants were not able to fully capture and exploit the collected light energy, but these constraints were greatly limited in the presence of Az. In general, the +Fu plants did not show changes in the activities of antioxidant enzymes, but displayed higher concentrations of reduced glutathione (GSH) than -Fu plants. The activities of superoxide dismutase, peroxidase, ascorbate peroxidase, glutathione peroxidase, glutathione reductase, and glutathione-S-transferase were increased upon B. oryzae infection, but such increases were lower in the +Fu plants. Catalase activity decreased in the inoculated plants compared to the non-inoculated plants regardless of fungicide treatment. The GSH concentration increased in response to the B. oryzae infection, and the +Fu plants sustained higher levels of GSH at advanced stages of fungal infection than did the -Fu plants. The inoculated plants exhibited an extensive oxidative stress as evidenced by higher concentrations of hydrogen peroxide and malondialdehyde compared to the non-inoculated plants, but lower and later increases were recorded in the +Fu plants than in the -Fu plants. The +Fu plants displayed higher activities of β- 1,3-glucanase, peroxidase, polyphenol oxidase (PPO) and lipoxygenase (LOX) in the absence of B. oryzae inoculation and of phenylalanine ammonia lyase, PPO and LOX at 24 hai compared to the -Fu plants. Concentrations of total soluble phenols (TSP) were transiently reduced by fungal infection in the +Fu plants, but such plants presented higher TSP levels at 144 hai relative to their -Fu counterparts. Irrespective of the fungicide treatment, B. oryzae infection increased activities of all defense enzymes studied, but such increases usually were higher for the -Fu plants than for the +Fu plants. Concentrations of lignin thioglycolic acid derivatives were increased following fungal infection in the -Fu plants. Microscopic analyses revealed that hyphae from B. oryzae colonized bulliform, bundle sheath, epidermal, guard, mesophyll and vascular bundle cells besides intercellular spaces, but fewer and smaller fungal cells were noticed in the +Fu than in the -Fu plants. However, the constrained fungal invasion verified in the +Fu plants was not accompanied by amplified defense reactions since cells of the - Fu plants reacted by accumulating phenol-like material, whereas such reaction was only limited in cells of the +Fu plants. Overall, our results showed that Az impaired the photosynthetic performance of non-infected plants by diffusive constraints but prevented, to a greater extent, the damage to the photosynthetic apparatus during the infection process of B. oryzae. In addition, Az reduced B. oryzae-induced oxidative stress by limiting brown spot development rather than by activating the antioxidant system. Although Az had transiently reprogrammed activities of defense enzymes, which may have contributed for explaining the reduced brown spot severity observed in the +Fu plants, its fungicidal activity played a major role in reducing B. oryzae infection.As estrobilurinas estão entre os principais fungicidas usados no controle de doenças ao redor do mundo. Em adição ao seu efeito fungicida, elas também podem afetar aspectos fisiológicos e bioquímicos de plantas tratadas. No entanto, as alterações fisiológicas, bioquímicas e microscópicas decorrentes da aplicação de azoxistrobina (Az), a principal estrobilurina do mercado, na cultura do arroz permanecem elusivas. Para responder essas questões, foram realizadas análises detalhadas de trocas gasosas, da fluorescência da clorofila a, dos sistemas antioxidativo e de defesa, bem como análises de microscopia de luz em plantas de arroz (cultivar Metica-1) as quais receberam ou não a aplicação de Az (plantas +Fu e -Fu, respectivamente) e foram inoculadas ou não com Bipolaris oryzae, agente causal da mancha parda. Plantas +Fu não inoculadas mostraram menor fixação de carbono (C) do que plantas -Fu, sendo que tal redução não esteve relacionada a limitações fotoquímicas ou bioquímicas, mas ao decréscimo na condutância estomática, o qual limitou o influxo de CO 2 às células do mesófilo. A fotossíntese das plantas -Fu decresceu com a infeção por B. oryzae, principalmente por limitações fotoquímicas e bioquímicas. O excesso de energia decorrente da limitada fixação de C nas plantas +Fu inoculadas foi termicamente e efetivamente dissipado até 72 horas após a inoculação (hai). Para as plantas -Fu, entretanto, esse mecanismo não foi suficiente para prevenir uma crônica fotoinibição da fotossíntese. As plantas inoculadas não foram capazes de capturar e explorar completamente a energia solar coletada, mas tais restrições foram grandemente limitadas na presença de Az. Em geral, plantas +Fu não inoculadas não apresentaram alterações na atividade de enzimas antioxidativas, mas exibiram maiores concentrações de glutationa reduzida (GSH) do que plantas -Fu. A atividade da superóxido dismutase, peroxidase, peroxidase do ascorbato, peroxidase da glutationa, redutase da glutationa e glutationa-S-transferase foram aumentadas em decorrência da infecção por B. oryzae, mas tais aumentos foram menores nas plantas +Fu. A atividade da catalase foi diminuída nas plantas inoculadas comparadas às não inoculadas, independentemente do tratamento com fungicida. A concentração de GSH aumentou em resposta à infecção por B. oryzae, e as plantas +Fu sustentaram maiores níveis de GSH em estágios avançados da infecção fúngica do que as plantas -Fu. As plantas inoculadas exibiram extensivo estresse oxidativo, como evidenciado pelas maiores concentrações de peróxido de hidrogênio e aldeído malônico comparado às plantas não inoculadas, porém aumentos menos pronunciados e mais tardios foram reportados nas plantas +Fu do que nas plantas -Fu. Plantas +Fu apresentaram maior atividade da β-1,3-glucanase, peroxidase, polifenol oxidase (PFO) e lipoxigenase (LOX) na ausência de inoculação com B. oryzae e de fenilalanina amônia liase (FAL), PFO e LOX 24 hai comparadas às plantas -Fu. A concentração de fenois solúveis totais (FST) foi transientemente reduzida pela infecção fúngica nas plantas +Fu, mas tais plantas apresentaram maiores níveis de FST 144 hai comparadas às plantas -Fu. Independentemente do tratamento com fungicida, a infecção por B. oryzae aumentou a atividade de todas as enzimas de defesa estudadas, mas tais aumentos foram usualmente maiores para as plantas -Fu do que para as plantas +Fu. A concentração de derivados da lignina e ácido tioglicólico foram aumentadas pela infecção fúngica nas plantas -Fu. Análises microscópicas revelaram que as hifas de B. oryzae colonizaram as células buliformes, da bainha do feixe, epidérmicas, guarda, do mesófilo e do feixe vascular, bem como espaçoes intercelulares, porém menos e menores células fúngicas foram observadas nas plantas +Fu do que nas plantas -Fu. No entanto, a limitada invasão fúngica verificada nas plantas +Fu não foi acompanhada por amplificadas reções de defesa, visto que as células das plantas -Fu reagiram através do acúmulo de material semelhante a fenois, considerando que tal reação foi limitada nas células de plantas +Fu. Portanto, nossos resultados mostraram que Az prejudicou a performance fotossintética de plantas não infectadas através de limitações difusivas, mas preveniu, numa grande extensão, o dano ao aparato fotossintético durante o processo infecioso de B. oryzae. Em adição, Az reduziu o estresse oxidative induzido por B. oryzae por limitar o desenvolvimento da mancha parda ao invés da ativação do sistema antioxidativo. Embora Az tenha reprogramado a atividade de enzimas de defesa, fato que pode ter contribuído para explicar a reduzida severidade da mancha parda observada em plantas tratadas +Fu, seu efeito fungicida desempenhou um papel fundamental em restringir a infecção por B. oryzae