Chromosomic band with restriction enzymes and fluorochromes in the Melipona (Hymenoptera: apidae)

As espécies do gênero Melipona são conhecidas como abelhas indígenas sem ferrão. Apresentam grandes relevâncias econômica e ecológica devido à sua importância na polinização e na produção de mel. Até o momento foram estudadas citogeneticamente 16 das 42 espécies descritas do gênero. Na citogenética, a utilização das endonucleases de restrição in situ (REs) tem se mostrado muito útil, por produzir informações sobre a constituição da cromatina. O presente trabalho teve como objetivos utilizar duas REs seguidas da coloração com fluorocromos, para obter informações a respeito da composição e organização da cromatina das três espécies do gênero Melipona (M. bicolor, M. quadrifasciata e M. subnitida); incrementar o entendimento dos mecanismos de atuação das enzimas de restrição in situ; e, com base no padrão de bandeamento, inferir sobre as relações de parentesco entre as espécies estudadas. Os cromossomos metafásicos foram tratados com a combinação das REs HaeIII e DraI, com os fluorocromos QM e CMA 3 , obtendo, assim, quatro tratamentos para cada espécie. As presenças ou ausências de bandas foram analisadas e os cladogramas, montados com o auxílio do programa PAUP ® . Foi reconhecida uma nova modalidade de atuação das REs nos cromossomos das espécies estudadas, que resultou no aumento da fluorescência de algumas regiões dos cromossomos. Os tratamentos com as REs parecem ter amplificado as marcações dos fluorocromos, provavelmente devido à descondensação do DNA, que aumentou a acessibilidade dos fluorocromos. A utilização dos caracteres obtidos com a aplicação das REs produziu um cladograma informativo, no qual se percebe uma grande divergência entre as espécies M. bicolor e M. subnitida.The bees of genus Melipona are known as stingless indigenous bees. They have great economical and ecological relevance due to their importance on pollination and honey production. Until present, 16 out of 42 species of Melipona have been cytogenetically studied. In cytogenetics, the use of in situ restriction endonucleases (REs) has been very useful for generating information towards a better comprehension of the nature of chromatin. The objective of this work was to apply two REs, followed by fluorochrome dying, to characterize chromatin composition and organization in three species (M. bicolor, M. quadrifasciata and M. subnitida); and infer about the degree of similarity among these species. Metaphase chromosomes were treated with the combination of the REs HaeIII and DraI with fluorochromes QM and CMA 3 , representing four treatments for each species. The presence or absence of bands were recorded as characters and a Neighbor Joining analysis was carried out with PAUP*. Combination of REs action and fluorochromes resulted in the increase of fluorescence at some regions of the chromosomes, probably because of the DNA decondensation, which increased the accessibility of the fluorochromes. REs patterns suggest greater divergence between the species M. bicolor and M. subnitida.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológic