Effects of a calcium quelant agent in the quality of frozen-thawed dog sperm

Objetivou-se por meio deste trabalho avaliar o efeito da redução da quantidade de cálcio livre no meio de congelamento, utilizando o quelante de cálcio EDTA nas concentrações de 0,3% e 0,5%, sobre a qualidade do sêmen descongelado de cães. O ejaculado de três cães sem raça definida foi coletado por manipulação peniana e avaliado quanto ao vigor, motilidade espermática, morfologia espermática e pelo teste hiposmótico (HOST). Posteriormente, o sêmen foi separado em três alíquotas, as quais foram diluídas respectivamente no meio controle (TGE), de forma a se obter uma concentração final de 50 x 106 espermatozoides móveis/mL, 6% de glicerol e 0,5% de Equex STM Paste® em meio Tris-Citrato com gema de ovo (20% V/V); no meio de congelamento EDTA 0,3, com a mesma constituição do TGE, porém acrescido de EDTA para uma concentração final de 0,3%; e no meio de congelamento EDTA 0,5 em que o EDTA foi acrescido para uma concentração final de 0,5%. Após envasado em palhetas de 0,25mL o sêmen de cada tratamento foi resfriado por duas horas e congeladas em vapor de nitrogênio por 15 minutos. As amostras foram descongeladas por imersão em água a 37oC, durante sete segundos e avaliadas da mesma forma que o sêmen fresco e pelos testes de termorresistência, de ligação à membrana perivitelina de ovo de galinha (MPOG) e quanto à integridade das membranas plasmática e do acrossoma por coloração com sondas fluorescentes. A concentração do cálcio foi dosada, em espectrofotômetro, no sêmen fresco diluído no meio TGE e depois de descongelado. Houve redução (Duncan a 5% de significância; p0,05) em relação ao grupo TGE, com 10,8% a 14% de espermatozoides apresentando ambas as membranas íntegras. No teste hiposmótico, não houve diferença (p>0,05) na quantidade de espermatozoides com integridade funcional da membrana nos tratamentos EDTA 0,3 e EDTA 0,5 em relação ao grupo TGE. Não houve diferença na quantidade de espermatozoides aderidos à MPOG e na longevidade espermática (TTR) entre o grupo TGE e os tratamentos EDTA 0,3 e EDTA 0,5. Não houve diferença (p>0,05) na motilidade espermática entre o grupo TGE (74,70%) e o tratamento EDTA 0,3 (62,78%) porém, houve redução (p 0.05) compared to group TGE, with 10.8 % to 14% of sperm showing both membranes intact. There was also no difference in the number of spermatozoa bound to MOPG in the group TGE and EDTA0.3 and EDTA0.5 treatments. Although there was no difference (p> 0.05) in sperm motility between the TGE group (74.70%) and EDTA0.3 (62.78%) treated group, this parameter decreased (p