Improvement of red and black beans for resistance to anthracnose, rust and angular leaf spot with the aid of molecular markers

Antracnose, ferrugem e mancha-angular, incitadas, respectivamente, por Colletotrichum lindemuthianum, Uromyces appendiculatus e Pseudocercospora griseola, são importantes doenças que causam sérios prejuízos à cultura do feijoeiro. O programa de melhoramento do feijoeiro do BIOAGRO/UFV desenvolveu uma linhagem com grãos carioca (Rudá R ) contendo os seguintes genes de resistência: Co-4, Co-6 e Co-10 (antracnose); Ur-ON (ferrugem) e Phg-1 (mancha-angular). Para transferir tais genes para feijão de grão preto, foi conduzido um programa de retrocruzamentos, auxiliado por marcadores moleculares, envolvendo Rudá R e o cv. Diamante Negro (genitor recorrente). A partir da autofecundação de 32 plantas RC3F1, foram obtidas 40 linhagens com grãos pretos que possuíam combinações de, no mínimo, três marcas ligadas aos genes mencionados. As linhagens foram avaliadas quanto à resistência a diferentes raças de C. lindemuthianum, U. appendiculatus e P. griseola. As linhagens DNR14 e DNR16 foram resistentes a todas as raças avaliadas de C. lindemuthianum, com exceção da raça 2047. As linhagens DNR12, DNR31, DNR36 e DNR38 foram resistentes às duas raças de U. appendiculatus avaliadas. As linhagens DNR3, DNR4, DNR5, DNR7, DNR8, DNR10, DNR12, DNR24, DNR30, DNR33 e DNR34 foram resistentes a todas raças de P. griseola avaliadas. O potencial produtivo das 40 linhagens também foi avaliado nas safras de inverno em 2006 e de seca em 2007. Todas as linhagens apresentaram rendimento estatisticamente igual ou superior a Rudá R e Diamante Negro. Para incrementar a pirâmide de genes no background preto, plantas RC3F2 (Diamante Negro x Rudá R ) contendo os genes Co-6, Co-10, Ur-ON e Phg-1 foram cruzadas com a isolinha carioca Rudá R1 , portadora dos genes Co-42, Co-5, Co-6, Co-10, Ur-ON e Phg-1. A partir deste cruzamento e seleção com marcadores moleculares, foram obtidas 35 famílias F4 com grãos pretos e com, no mínimo, cinco marcas de resistência. Plantas F2 [RC3F2 (Diamante Negro x Rudá R ) x Rudá R1 ], contendo os genes Co-42, Co-5, Co-6, e Phg-1, foram cruzadas com indivíduos de famílias F2:3, contendo os genes Ur-ON, Ur-5 e Ur-11, para transferência de genes Ur para a pirâmide. Foi possível obter oito famílias F3 com, no mínimo, cinco marcas associados a genes de resistência, porém, duas delas apresentaram grãos carioca e as demais, grãos fora dos padrões aceitáveis para os grupos carioca e preto. Plantas [RC3F2 (Diamante Negro x Rudá R ) x Rudá R1 ], contendo os genes Co-42, Co-5, Co-6, Co-10, Ur-ON e Phg-1 foram cruzadas com o cv. MAR 2 (Phg-MAR 2) e as que continham os genes Co-42, Co-5, Co-6, Co-10 e Ur-ON foram cruzadas com o cv. Cornell 49-242 (Phg-3). Plantas RC3F2 (Diamante Negro x Rudá R ) contendo os genes Co-4, Co-6, Co-10, Ur-ON e Phg-1, foram cruzados com indivíduos RC3F2 (Rudá x BAT 332), que possuíam o gene Phg-62. Nos três cruzamentos, a cada geração as plantas obtidas foram selecionadas com marcadores moleculares ligados a cada gene envolvido nos cruzamentos além dos marcadores para os genes I e bc-3. A partir do primeiro cruzamento foram obtidas 16 plantas com, no mínimo, oito genes, sendo que nove delas geraram sementes de cor preta. No segundo, obteve-se 13 plantas com oito ou nove genes que geraram somente sementes F3 pretas, mas com brilho. No terceiro, dez famílias F4 foram obtidas com, no mínimo, dois genes e todas com grãos pretos. Para transferir genes de resistência para feijões de grão vermelho, cruzamentos e ciclos de retrocruzamentos entre o cv. Vermelhinho (genitor recorrente) e Rudá R foram conduzidos, bem como entre Ouro Vermelho (genitor recorrente) e Rudá R1 . Nesses cruzamentos as seleções também foram realizadas por marcadores moleculares ligados aos genes envolvidos e no padrão de cor dos grãos. Para o cruzamento entre Vermelhinho e Rudá R foram obtidas 19 famílias RC2F3 contendo no mínimo dois genes e com grãos vermelhos. No outro cruzamento, 29 famílias RC2F3 de grãos vermelhos e com quatro marcas, no mínimo, foram selecionadas. Diante dos resultados podê-se concluir que a seleção assistida por marcadores moleculares no processo de obtenção de linhagens com vários genes de resistência é eficiente, que os marcadores moleculares ligados a genes de resistência devem ser altamente específicos para que possam auxiliar no processo de transferência de genes para outros backgrounds genéticos e que a transferência de genes entre cultivares de grupos de cor de grão diferentes é demorado, exigindo a realização de um maior número de retrocruzamentos para a recuperação do tipo de grão original.Anthracnose, rust, and angular leaf spot incited by Colletotrichum lindemuthianum, Uromyces appendiculatus and Pseudocercospora griseola, respectively, are important diseases causing serious damages to the common bean crop. The common bean breeding program of BIOAGRO/UFV developed a line with carioca type grains (Rudá "R") containing the following resistance genes: Co-4, Co-6 and Co-10 (anthracnose); Ur-ON (rust) and Phg-1 (angular leaf spot). To transfer those genes to a black bean background, a backcrossing program was conducted with the aid of molecular markers, by involving Rudá "R" (donor genitor) and cultivar Diamante Negro (recurrent genitor). By selfing 32 BC3F1 plants, 40 black grained lines were obtained that possessed combinations with at least three markers linked to those genes. The lines were evaluated for resistance to the different races of C. lindemuthianum, U. appendiculatus and P. griseola. Lines DNR14 and DNR16 were resistant to all evaluated races of C. lindemuthianum, except for race 2047. Lines DNR12, DNR31, DNR36 and DNR38 were resistant to two races of U. appendiculatus. Lines DNR3, DNR4, DNR5, DNR7, DNR8, DNR10, DNR12, DNR24, DNR30, DNR33 and DNR34 were resistant to all races of P. griseola tested. The yield potentials of all 40 lines were evaluated during the winter season of 2006 and the dry season of 2007. The yield potentials of all lines were statistically equal to or higher than those of Rudá R and Diamante Negro. To increase the gene pyramid in the black-type background BC3F2 plants Diamante Negro x Rudá "R") containing the genes Co-6, Co-10, Ur-ON and Phg-1 were crossed with the carioca line Rudá "R1" carrying the genes Co-42, Co-5, Co-6, Co-10, Ur-ON and Phg-1. From this crossing and selection with molecular markers, 35 F4 families with black grains and at least five resistance markers were obtained. F2 plants [BC3F2 (Diamante Negro x Rudá "R") x Rudá "R1"] containing the genes Co-42, Co-5, Co-6, and Phg-1 were crossed with plants of the F2:3 families containing the genes Ur-ON, Ur-5 and Ur-11 for transfering the Ur genes to the black bean pyramid. It was possible to obtain eight F3 families with at least five markers associated to resistance genes; however, two of them showed carioca type grains, whereas the grains of the other ones did not present the grain patterns acceptable for either the groups carioca or black. Plants [BC3F2 (Diamante Negro x Rudá "R") x Rudá "R1"] containing the genes Co-42, Co-5, Co-6, Co-10, Ur-ON and Phg-1 were crossed with the cultivar MAR 2 (Phg-MAR 2) and those with the genes Co-42, Co-5, Co-6, Co-10 and Ur-ON were crossed with the cultivar Cornell 49-242 (Phg-3). BC3F2 plants (Diamante Negro x Rudá "R") containing the genes Co-4, Co-6, Co-10, Ur-ON and Phg-1 were crossed with BC3F2 individuals (Rudá x BAT 332) harboring the Phg-62 gene. In the three crossings and at each generation, the plants obtained were selected with molecular markers linked to each gene involved into crossings and also with markers for the genes I and bc-3 which confer resistance to the Bean Common Mosaic Virus. From the first cross, 16 plants with at least eight genes were obtained, and nine out of the 16 plants generated black-colored seeds. From the second cross, 13 plants with eight or nine genes generating only black F3 seeds were obtained, but they were all shiny. From the third cross, ten F4 families with black grains and at least two resistance genes were obtained. To transfer resistance genes to red-grained beans, crossings and backcrossing cycles were conducted between the cv. Vermelhinho (recurrent genitor) and Rudá "R", as well as between cv. Ouro Vermelho (recurrent genitor) and Rudá "R1". In those crossings, selection were also based on molecular markers linked to the genes of interest and on the grain color pattern. For the crossing between cv. Vermelhinho and Rudá "R", BC2F3 19 families containing at least two resistance genes and red grains were obtained. In the other crossing, 29 BC2F3 families with red grains and at least four markers were selected. According to the results, the following conclusions were drawn: the selection assisted by molecular markers in the process for obtaining lines with several resistance genes is efficient; the molecular markers should be tightly linked to the resistance genes; and transferring the genes between cultivars from different grain groups is slow, and requires a high number of backcrossings for recovering the original grain type.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológic