Suscetibilidade genética para a hipertensão

Tese de mestrado em Biologia Humana e Ambiente, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, em 2018A hipertensão e uma doença multicausal, multifatorial e poligénica, caracterizada pela presença de níveis elevados de tensão arterial e encontra-se frequentemente associada a distúrbios metabólicos e hormonais, com presença de hipertrofia cardíaca e elevação do tónus vascular. E também considerada uma síndrome por estar fortemente associada a um agregado de distúrbios metabólicos, tais como a obesidade, aumento da resistência a insulina, diabete mellitus, e dislipidemias, que podem contribuir de forma significativa para o aumento da incidência da hipertensão e outras doenças cardiovasculares, bem como estarem na base do desenvolvimento das mesmas. Este trabalho teve como objetivo avaliar a suscetibilidade genética para o desenvolvimento de hipertensão na população portuguesa, mais especificamente pretendeu-se testar a associação de variantes nos genes NOS3, HBA e G6PD com a hipertensão (fenótipo distante) e com potenciais factores de risco (fenótipos intermédios). Para tal foram analisadas amostras de sangue periférico de 377 indivíduos portugueses, com idade compreendida entre os 19 e 98 anos, dos quais 227 eram do sexo feminino e 144 do sexo masculino, sendo 243 hipertensos e 134 normotensos (população controlo). Foram ainda analisadas 22 amostras de uma população africana não hipertensa (Moçambique). Para a pesquisa do número de repetições de 27 bp em tandem (VNTR) no intrao 4 do gene NOS3 foi usada a PCR, para a pesquisa do SNP rs1050829 no gene G6PD foi usado a PCR-RFLP e para a pesquisa da deleção alfa-talassémica de -3,7kb no agrupamento génico da alfa-globina foi usada uma metodologia de Gap-PCR. Para a pesquisa de variantes no exao 2 dos genes HBA1 e HBA2 foi usada a PCR seguida de sequenciação de Sanger Os cálculos estatísticos foram realizados no programa estatístico SPSS 25.0, sendo o nível de significância estatístico estabelecido para p-value < 0,05. Dado que existia diferença entre os dois grupos analisados (hipertensos e normotensos) no que diz respeito a idade (mas não ao género), sempre que necessário foi realizado o ajuste para este fator de confundimento. Os resultados deste estudo mostraram que a presença do alelo 4a em NOS3 (em heterozigotia ou homozigotia) esta associado a um maior risco de ser hipertenso [OR = 2,297; IC (95%) = (1,206 – 4,376); p = 0,011]. Observou-se tambem que o IMC e a glicemia apresentavam diferenças estatisticamente significativas entre hipertensos e normotensos, respetivamente, p = 0,008 e p = 0,036. Alem disso, foi observado que na ausência do alelo 4a o IMC, a glicemia e a uricemia estão associadas a hipertensão (p = 0,005; p = 0,001 e p = 0,013) e que poderão ser fatores de risco independentes. Não se verificaram quaisquer diferenças estatisticamente significativas para a variante da G6PD e para a presença da alfa-talassemia entre os grupos (hipertensos e normotensos). Os resultados obtidos neste estudo indicam que a presença do alelo 4a no gene NOS3 e um fator de suscetibilidade genética para o desenvolvimento de hipertensão na população portuguesa. Este facto realça a importância do metabolismo do óxido nítrico nesta patologia. A identificação de variantes genéticas associadas ao fenótipo hipertenso, poderá permitir o reconhecimento de indivíduos susceptíveis e a classificação dos pacientes em subgrupos com distintas características genéticas, de maneira a serem delineadas as melhores estratégias preventivas e terapêuticas.Hypertension is a multicausal, multifactorial and polygenic disease, characterized by the presence of elevated arterial tension levels and is frequently found associated with metabolic and hormonal disturbances, with the presence of cardiac hypertrophy and elevation of the vascular toning. It is also considered a syndrome because it is strongly associated with an aggregate of metabolic disturbances, such as obesity, increased insulin resistance, diabetes mellitus and dyslipidemia, which may contribute significantly to increased incidence of hypertension and other cardiovascular diseases, as well as being at the basis for their development. This project aimed to evaluate the genetic susceptibility to hypertension within the Portuguese population, more specifically to test the association of variants in genes NOS3, HBA and G6PD with hypertension (distant phenotype). Also, the contribution of some biochemical/clinical parameters as potential risk factors (intermediate phenotypes) were analysed. For that, peripheral blood samples of 377 Portuguese individuals being 243 hypertensives and 134 normotensives (population control) were investigated. The sample was composed by 227 females and 144 males with ages ranging between 19 and 98 years. Further, 22 samples of a non-hypertensives African population was analyzed (Mozambique). The characterization of the number of repetitions of 27 bp in tandem (VNTR) in 4 intron of the gene NOS3 was performed by PCR, the SNP rs1050829 in G6PD gene was analysed by PCR-RFLP and the study of -3,7kb alpha-thalassemic deletion in the alpha-globin cluster was performed by Gap-PCR. To search for variants in exon 2 of HBA1 and HBA2 genes PCR followed by Sanger sequencing. The statistical calculations were made using the statistics tool SPSS 25.0, with the statistical significance level set to p-value