Avaliação da atividade antimicrobiana, imunomoduladora eanticancerígena de extratos de mirtilo e de framboesa

Tese de mestrado, Controlo de Qualidade e Toxicologia dos Alimentos, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2016Vários estudos têm evidenciado os efeitos benéficos de uma alimentação equilibrada, rica em hortofrutícolas, na redução do risco de desenvolvimento de doenças como as DCV, a diabetes e o cancro. Dos compostos presentes nestes alimentos, os polifenóis parecem ser os responsáveis por alguns destes efeitos. As bagas, denominação comummente usada para designar frutos pequenos de cor intensa, são particularmente ricas em compostos fenólicos. De entre as bagas, destacam-se, pela sua crescente produção nacional e presença no mercado, o mirtilo e a framboesa. Por serem escassos os estudos que tenham avaliado os efeitos biológicos destas bagas (e dos seus componentes) em Portugal, a presente dissertação teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana, imunomoduladora e anticancerígena de extratos de mirtilo e framboesa de origem portuguesa. Após a preparação dos extratos, avaliou-se a atividade antibacteriana em bactérias Gram-positivo e Gram-negativo, a atividade antifúngica em três espécies de Candida, a capacidade de inibição da produção de NO por macrófagos RAW 264.7, o efeito citotóxico em macrófagos e a capacidade de inibição da proliferação de linfócitos T e de duas linhas celulares de cancro de próstata. Verificou-se uma ausência de atividade antibacteriana por parte de ambos os extratos e uma capacidade fungistática do extrato de framboesa a 100μg/mL em C. albicans e C. parapsilosis. Ambos os extratos inibiram a produção de NO por macrófagos RAW 264.7 de uma maneira dose-dependente, com um IC50, em μg/mL, de 53,58 ± 7,21 para o mirtilo e de 44,36 ± 8,67, para a framboesa, sem efeitos citotóxicos. Também se verificou uma inibição dose-dependente da proliferação de linfócitos T, contudo sempre inferior a 30%, sem possibilitar o cálculo do IC50. O mesmo se verificou relativamente às linhas celulares de cancro de próstata, uma vez que, para ambas, a inibição por parte dos extratos não ultrapassou os 25%. De uma forma geral, os resultados foram mais pronunciados para o extrato de framboesa, o que pode ser explicado pelo maior teor de compostos fenólicos deste extrato relativamente ao de mirtilo (22,5μg EAG/mg e 18,7μg EAG/mg). Os resultados do presente trabalho permitem concluir que os compostos presentes nos mirtilos e framboesas testados têm um efeito imunomodulador, principalmente anti-inflamatório e, de uma forma menos pronunciada, de inibição da proliferação de linfócitos T. Relativamente aos efeitos em linhas celulares de cancro, os resultados parecem promissores, principalmente em relação à framboesa, uma vez que mostrou inibir a proliferação das duas linhas celulares usadas. Quanto à atividade antimicrobiana, as concentrações testadas, significativamente inferiores às descritas na literatura, não permitiram verificar efeitos antibacterianos para ambos os extratos nem antifúngicos para o extrato de mirtilo. Pode inferir-se que o uso de extratos em concentrações superiores às testadas ou a purificação dos mesmos em estudos futuros permitirá a obtenção de resultados mais significativos.Several studies have demonstrated the positive effects of a balanced, rich in fruits and vegetables diet in the risk reduction and prevention of some diseases, such as CVD, diabetes and cancer. Phenolics seem to be the vegetable compounds responsible for some of the effects associated with these foods. Berries, a commonly used name to refer to small intense colourful fruits, are particularly rich in phenolic compounds. Among berries, bilberry and raspberry stand out because of the rise in the national production and availability of such berries. Due to the lack of studies evaluating biological effects of these berries (and their compounds) in Portugal, this thesis aims to evaluate the antimicrobial, immunomodulatory and anticancer activity of extracts prepared with nationally produced bilberry and raspberry. After preparing the extracts, the antibacterial activity in Gram-positive and Gramnegative bacteria, the antifungal activity in three Candida species, the inhibitory effect on RAW 264.7 macrophages NO production, the cytotoxic effect in macrophages and the proliferation inhibition of T cells and two prostate cancer cell lines were evaluated. The raspberry extract demonstrated fungistatic capacity in C. albicans and C. parapsilosis at 100μg/mL. No antibacterial activity was shown with any of the extracts. Both the extracts inhibited the RAW 264.7 macrophages NO production in a dosedependent manner, with an IC50, of 53,58 ± 7,21μg/mL and 44,36 ± 8,67μg/mL, for the bilberry and raspberry extracts, respectively, without cytotoxic effects. A dosedependent inhibition of T lymphocyte proliferation was also shown, with inhibition percentages always under 30%, thus making it impossible to determine the IC50. The same was seen in relation to the prostatic cancer cell lines, since the extracts inhibited cells proliferation in less than 25%. In general, the results were more pronounced in terms of the raspberry extracts, which can be explained by the richest composition of this extract in phenolics in relation to the bilberry extract (22,5μg GAE/mg and 18,7μg GAE/mg). Taken together, these results indicate that the bilberry and raspberry tested compounds have an immunomodulator effect, mainly anti-inflammatory and, in a less significant way, a T lymphocyte proliferation inhibition effect. In relation to the results obtained in cancer cell lines, these seem promising, especially in the case of raspberries, because of its inhibition of both the cancer cell lines. With regard to the antimicrobial activity, the extract concentrations used in this study were significantly lower than those described in the literature and didn’t show antibacterial effects for either of them nor antifungal effects for the bilberry extract. It can be inferred that the use of higher extract concentrations or the purification of the extracts in future studies will lead to the emergence of more significant results