Citotoxicidade do peróxido de hidrogénio: estudos do comportamento celular numa linhagem de células osteoblásticas fetais humanas condicionalmente imortalizadas

Tese de mestrado, Medicina Dentária, Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina Dentária, 2016Objetivos: Avaliar se peróxido de hidrogénio (PH) resultante da difusão radicular proveniente de técnicas de branqueamento interno é citotóxico uma linhagem de células osteoblásticas. E se a citotoxicidade aumenta em função da concentração e do tempo de exposição. Materiais e Métodos: As células osteoblásticas (hFOB 1.19) foram cultivadas em placas de 96-poços de cultura, com uma densidade celular de 1,0 x104 células/poço, incubadas a 37ºC, humidade relativa de 95% e CO2 a 5%. No primeiro estudo, as células foram expostas ao PH em concentrações entre 0,0 e 15,0 μg/ml por um período de 1 hora, 24 e 72 horas. No segundo estudo, as células foram expostas pelo mesmo período de tempo, em concentrações entre 0,0 e 1,5 μg/ml. Ao fim do tempo de incubação avaliou-se viabilidade celular através de um kit baseado na redução da rezasurina. Os valores foram medidos por fluorescência. Captou-se imagens representativas das culturas através do microscopia invertida com óptica de contraste de fase. Resultados: No primeiro estudo, ao fim de 1 hora de exposição ao PH, a viabilidade diminuiu entre 49,46 e 72,71 % (p<0,005). Após 24horas de exposição, registou-se uma diminuição entre 76,42 e 79,04 % (p<0,005) atingindo o mínimo às 72 horas, em que a viabilidade tem um decréscimo de 93,3 a 95,2% (p<0,005). No segundo estudo, após uma hora de incubação, registaram-se diminuições de viabilidade entre 55,18 e 50,15% (p<0,005) enquanto que às 24 horas de exposição observou-se um decréscimo de viabilidade entre 62,02 e 64,89%. Às 72 horas, o decréscimo de viabilidade situou-se entre 39,25 e 41,21% (p<0,005) comparativamente com o controlo não tratado com H2O2. Conclusão: A exposição ao peróxido de hidrogénio nas concentrações testadas diminui significativamente a viabilidade celular das células osteoblásticas. No entanto, não podemos correlacionar diretamente esse decréscimo com o tempo de exposição. Serão necessários estudos complementares para confirmar as observações deste trabalho.Objectives: To evaluate whether hydrogen peroxide resulting from root diffusion during internal bleaching techniques is cytotoxic for a cell line of conditionally immortalized human fetal osteoblasts (hFOB 1.19) and if cytotoxicity is associated with the concentration and exposure time. Materials and Methods: Osteoblast cells (hFOB1.19) were cultured in 96-well culture with a cell density of 1.0 x104 cells / well and incubated at 37 ° C, with a relative humidity of 95% and 5% CO2. In a first study, the cells were exposed to hydrogen peroxide (PH) solutions with concentrations ranging between 0.0 μg / ml and 15.0 μg / ml for a period of 1 hour, 24 and 72 hours. In the second study, the cells were exposed during the same time points to H2O2 concentrations ranging between 0.0 μg / ml and 1,5 μg / ml. At the end of incubation time, cell viability was assessed using a rezasurin-based kit and measured using a fluorometer. Results: In the pilot study, after 1 hour of exposure to PH, cell viability decreased between 49.46 and 72.71% (p <0.005). While at the 24 hours, there was a decrease between 76.42 and 79.04% (p <0.005) reaching a minimum at 72 hours when cell viability decreased from 93.3 to 95.2% (p <0.005). In the second study, it was observed that after 1-hour incubation, viability decreased between 55.18 and 50.15% (p <0.005), while after 24 hours of exposure those decreases ranged between 62.02 and 64.89 %. At 72 hours the decrease in viability was between 39.25 and 41.21% (p