Estudo da ação citotóxica dos adenovírus Adp53 e AdCDKN2A em associação com cisplatina sobre linhagens de carcinoma de pulmão de células não pequenas (NSCLC)

Tese de mestrado. Biologia (Biologia Molecular e Genética). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2013O cancro do pulmão inicia seu crescimento celular descontrolado em tecidos do pulmão. Existem dois tipos principais, carcinoma de pulmão de células não pequenas (NSCLC) e carcinoma de pulmão de células pequenas (SCLC). NSCLC é o mais freqüente, entre 85 – 90% dos casos. Cerca de 50% dos NSCLC apresentam mutações em p53 e mais de 90% dos SCLC no gene Rb. A CDKN2A é outra proteína importante no ciclo celular que tem sido identificada mutada ou mesmo inativada em mais de 30% de todos os cancros. Muitos estudos indicam que as mutações em p53 conferem quimioresistência às células de cancro do pulmão. A reposição desses genes ocorre através da tecnologia de terapia génica, pela transferência de vetores, onde está contido o gene de interesse. Este estudo monitorou a citotoxicidade das células com a administração dos vetores virais de adenovírus Adp53 e AdCDKN2A em combinação com a cisplatina, visto ser um dos principais quimioterápicos utilizados no tratamento do cancro do pulmão. Foram avaliados dois regimes de tratamento. No primeiro, as células foram transduzidas com os vetores e depois de 24 horas tratadas com cisplatina (5 e 10 μg/mL). No segundo regime, primeiro tratamos as células com cisplatina (0,05 e 0,1 μg/mL) e depois de 24 horas foram transduzidas com os vetores e medidas a sua viabilidade celular com o reagente PrestoBlue@Cell Viability Reagent (Invitrogen, Inc., Carlsbad, CA, USA). Resultados preliminares mostraram que os tratamentos combinados, quimioterápico com genes terapêuticos, tiveram melhor resposta para ambas as linhagens celulares, e que, chegam a ter a mesma percentagem de morte celular, do que o tratamento químico isolado, utilizando uma concentração de quimioterápico cerca de cem vezes menor.Lung cancer starts its uncontrolled cell growth in lung tissues. There are two main types, non-small cell lung carcinoma (NSCLC) and small cell lung carcinoma (SCLC). NSCLC is most frequent about 85 – 90% of cases. Around 50% NSCLC show mutations on p53 and over 90% SCLC on Rb gene. The CDKN2A is another important protein in cell cycle that has been identified mutated or inactivated in over 30% of all cancers. Several studies indicate that mutations on p53 confer chemoresistance to lung cancer cells. The replacement of these genes occurs by the technology of gene therapy, by vectors transfer, which contained the gene of interest. This study monitored the cytotoxicity of cells with administration of adenoviral vectors Adp53 and AdCDKN2A in combination with chemotherapy with cisplatin, that has been the chemotherapeutic most frequently used on lung cancer treatment. We evaluated two treatment systems: in the first one, cells were transduced with adenoviral vectors and treated with cisplatin (5 and 10 μg/mL) 24 hours later; in the second one, cells were first treated with cisplatin (0.05 and 0.1 μg/mL) and transduced with the adenoviral vectors 24 hours later. Cellular viability was then measure with PrestoBlue@Cell Viability Reagent (Invitrogen, Inc., Carlsbad, CA, USA). Preliminary results show that the combined treatment, chemotherapy with therapeutic genes, revealed better response in both cell lines, and, even presented the same percentage of cell death as the chemo treatment alone, for about an one hundred times lower chemotherapy dosage