Modulação das funções da célula dendrítica por variantes clonais de Burkholderia cenocepacia isoladas de um doente com fibrose quística

Tese de mestrado. Biologia (Biologia Humana e Ambiente). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2013As bactérias do complexo Burkholderia cepacia (Bcc) são responsáveis por infeções respiratórias severas em indivíduos suscetíveis, em particular doentes com fibrose quística (FQ). Estas bactérias são especialmente temidas devido à sua elevada transmissibilidade, à sua inerente resistência à terapia antimicrobiana e ao risco de síndrome da cepacia. Tem sido descrito que Burkholderia cenocepacia, uma das bactérias mais virulentas do Bcc, possui mecanismos que lhe permite evadir a resposta imune do hospedeiro, através da modulação das funções de células fagocíticas. De entre estas, as células dendríticas (DCs) desempenham um papel essencial na defesa do hospedeiro contra agentes patogénicos invasores, relacionando a resposta imune inata e adaptativa. Contudo, o seu papel no desenvolvimento da estratégia evasiva de B. cenocepacia ao sistema imune do hospedeiro, permanece pouco esclarecido. Para clarificar esta questão, neste trabalho foi estudada a interação das DCs com 4 variantes clonais de B. cenocepacia, isoladas de um mesmo doente com FQ. Concretamente, pretendeu-se verificar se existiam diferenças entre estas variantes ao nível de: internalização pelas DCs, capacidade de inibirem e/ou induzirem o processo de maturação das DCs, efeito na viabilidade das DCs e a consequência imunológica, em termos da ativação da resposta adaptativa. Demonstrou-se então que as variantes clonais consideradas mais virulentas, com base em dados anteriores, são as mais internalizadas pelas DCs. Todas as variantes, mas especialmente a última isolada imediatamente antes da morte do doente não induzem a maturação das DCs, processo que normalmente acontece nestas células em resposta a patogénios e que é essencial para ativar uma resposta adaptativa efetora. Foi também a última variante clonal isolada do doente que induziu mais morte celular (apoptose) nas DCs, reforçando a ideia de que é a variante mais virulenta. Apesar destes resultados, as DCs após internalização das várias bactérias, mas especialmente com a última variante, são capazes de estimular a expressão de IFN-γ em células T, sugerindo a indução de uma resposta adaptativa efetora. No entanto, este resultado não exclui a hipótese de que a modulação das funções das DCs pelos isolados de B. cenocepacia seja um importante contributo para restringir, pelo menos parte desta resposta, sendo necessário mais estudos para esclarecer este assunto.Bacteria of the Burkholderia cepacia complex (Bcc) are responsible for severe respiratory infections in susceptible individuals, particularly patients with cystic fibrosis (CF). These bacteria receive special attention duo to their high transmission, inherent resistance to antimicrobial therapies and risk of cepacia syndrome. It has been reported that Burkholderia cenocepacia, one of the most virulent Bcc bacteria, have mechanisms that allow the evasion to the host immune response by modulating phagocytic cells functions. Among them, dendritic cells (DCs) play an essential role in host defense against invading pathogens, creating a link between the innate and adaptive immune response. However, its role in the development of the evasive strategies of B. cenocepacia to elude host immune system, remains poorly understood. To clarify this issue, in this work we studied the interaction of DCs with 4 clonal variants of B. cenocepacia isolated from the same CF patient. Specifically, we wanted to determine whether there were differences between these variants in terms of: internalization by DCs, ability to inhibit and / or induce the maturation of DCs, effect on the viability of DCs and immunologic consequence, in terms of activation of the adaptive response. It was demonstrated the clonal variants considered more virulent, based on previous data, were better internalized by DCs. All variants, but especially the last variant isolated from the patient, immediately before its death, did not induce DCs maturation, a process that typically occurs in these cells in response to pathogens which is essential to enable an adaptive effector response. It was also the last variant isolated from the patient which induced more cell death (apoptosis) in DCs, reinforcing the idea that this variant is more virulent. Despite these results, DCs after internalizing the various bacteria, but especially the last variant, is capable of stimulating the expression of IFN-γ by T cells, suggesting the induction of an effector adaptive response. However, this result does not exclude the possibility that the modulation of DCs functions by B. cenocepacia clonal variants may be an important contribution to restrict, at least part, of this response, being more studies necessary to clarify this issue