A study of the stability of vitamin 25[OH]D2 and 25[OH]D3

During the industrialization of the 19th century the negative health effects of vitamin D was discovered as children in the cities developed osteomalacia or more commonly known as rickets caused by vitamin D deficiency. Vitamin D is produced in the skin from 7-dehydrocholesterol during sun-exposure and enhances intestinal phosphor and calcium absorption thus enhancing the bone remodeling process. Now, in the 21st century, Vitamin D is still relevant as positive health effects have been recognized and with it an increased number of samples and a demand for accurate analyzing. Vitamin D is commonly believed to be sensitive to ultraviolet radiation in serum and blood samples and therefore have traditionally been kept protected from light exposure from the time of sampling until the finished analyze. However recent studies have proven 25- hydroxyvitamin D (25[OH]D) to be stable in both whole blood and serum. As previous studies have been primarily conducted in research laboratories with the aim to study vitamin D under specific research-laboratory conditions the aim of this study was to study the stability of 25[OH]D in serum and whole blood within both primary care- and hospital laboratories under normal and exaggerated conditions with the purpose to evaluate possible pre-analytical issues with everyday handling processes. The assay used was high pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry, HPLCMS/MS, and the sought analytes 25-hydroxyvitamin D2 and 25-hydroxyvitamin D3, 25[OH]D2 and 25[OH]D3. The results showed that 25-hydroxyvitamin D is stable in serum for 24 hours at room temperature whilst exposed to light both ultraviolet and fluorescent. The analyte is also stable for up to four freeze-thaw cycles rendering the process of light-protection and samples frozen immediately after centrifugation superfluous. The results also ensure reliable results even if samples are accidently left on benchtops or saved refrozen to be reanalyzed at a later date.Under den industriella revolutionen på 1800 talet upptäcktes de negativa hälsoeffekterna av vitamin D-brist då barnen i städerna utvecklade rakit (osteomalaci) eller engelska sjukan som sjukdomen också kallas på grund av brist på sol och D-vitamin. Vitamin D produceras i huden från 7-dehydrokolesterol vid solexponering och ökar upptaget av fosfor och kalcium i tarmen som i sin tur förbättrar återuppbyggnaden av skelettet. Vitamin D är fortfarande aktuell även nu i vår tid men då för dess nyupptäckta hälsofrämjande egenskaper som till exempel förebyggandet av coloncancer. Detta medför även en ökning av antalet analyser och kräver därmed en adekvat analysmetod. Traditionellt har det antagits att vitamin D är ljuskänsligt i alla former därför har blod och serum ljusskyddats, från provtagningstillfället fram tills dess att analysen är utförd. Dock har nya studier visat att 25-hydroxyvitamin D (25[OH]D) är mycket stabilt bundet till vitamindbindande protein i både serum och helblod. Syftet med studien var att utvärdera om 25[OH]D i serum och helblod behöver ljusskddas genom att studera stabiliteten hos 25[OH]D i både serum och helblod under normala primärvårdslaboratorie- och sjukhuslaboratorieförhållanden samt under extrema förhållanden för att utvärdera eventuella preanalytiska problem eller fel relaterade till den vardagliga hanteringen av vitamin D prover. Proverna analyserades med högupplösande vätskekromatografi-tandem masspektrometri, HPLC-MS/MS, och de sökta analyterna var 25-hydroxyvitamin D2 and 25-hydroxyvitamin D3, 25[OH]D2 och 25[OH]D3. Resultat från studien visade att 25-hydroxyvitamin D är stabilt i serum i 24 timmar i rumstemperatur med ljusexponering från både ultraviolett och fluorescerande ljus. 25-hydroxyvitamin D är även stabil i serum upp till fyra frys- och tiningscykler. Detta gör att provhanteringen kan förenklas genom att dessa prover inte behöver ljusskyddas samt att serumet ej behöver frysas in direkt efter centrifugering. Resultatet säkerställer även tillförlitliga resultat om prover lämnas framme på bänken av misstag eller om prover behöver sparas och frysas om för att analyseras vid senare tillfälle