Optimierung der Methode zur massenspektrometrischen Identifizierung von Bindungsstellen zytotoxischer Platin(II)-Verbindungen an Proteinen

Platin(II)-Verbindungen werden in der nicht-invasiven Krebstherapie bei einer Vielzahl von soliden Tumoren eingesetzt. Die zytotoxische Wirkung beruht darauf, dass Platinionen Querverbindungen mit Nukleophilen wie der DNA oder Proteinen ausbilden können. Dieser Mechanismus verursacht eine Hemmung der Replikation und Transkription der DNA und führt zur Apoptose von Zellen. In dieser Diplomarbeit wurden die Wechselwirkungen zwischen Platin(II)-Verbindungen und Modellproteinen Albumin und Ubiquitin massenspektrometrisch charakterisiert. Dazu wurden top-down und bottom-up Methoden eingesetzt. Cisplatin und Zeise-Salz wurden als Platinverbindungen und ein Verdau mittels Trypsin für die bottom-up Methode gewählt. Zur Analyse der Proben wurde LC-MS2 verwendet. Die Auswertung der erhaltenen Spektren erfolgte mit der Proteome Discoverer und der Apms-Software. Zusätzlich wurden beide Methoden miteinander verglichen, um mögliche Veränderungen der Platinbindungsstellen zu identifizieren. Zusammenfassend kann die massenspektrometrische Analyse von Metall Protein Wechselwirkungen ein hilfreiches Werkzeug sein, um eine einfache Untersuchung von Metallbindungsstellen an Proteinen durchzuführen.Platin(II)-compounds are used in non-invasive cancer therapy for a variety of solid tumors. The cytotoxic effect is due to the cross-linking of the platin ions with nucleophiles such as DNA or proteins. This pathway leads to inhibition of DNA replication and transcription and causes cell apoptosis. In this diploma thesis I characterize the interactions between platin(II)-compounds and the model proteins ubiquitin and albumin by mass spectrometric approaches using top-down and bottom-up methods. For this purpose Cisplatin and Zeises salt were selected as platinum agents and tryptic digestion for the bottom-up method. LC-MS2 was used for the analysis of the samples and the obtained spectra were evaluated with Proteome Discoverer and Apms-Software. In addition, both methods were compared in order to identify possible changes in platinum binding sites. The outlook of this work is represented by the metal protein interaction analysis by mass spectrometry as a useful tool to obtain a simple and small-scale set up for characterizing metal to protein interactions.Arbeit an der Bibliothek noch nicht eingelangt - Daten nicht geprüftInnsbruck, Univ., Diplomarb., 2020(VLID)482495