Determinación del potencial de membrana mitocondrial mediante citometría de flujo durante el proceso de criopreservación de espermatozoides epididimarios de alpacas

The aim of this study was to demonstrate, by flow cytometry, that the percentage of alpaca spermatozoa with high mitochondrial membrane potential (MMP) is significantly reduced after the cryopreservation process. Forty-one alpaca testicles were obtained from a local slaughterhouse in the Ninacaca district, Pasco, Peru. The spermatozoa were recovered from the tail of the epididymis with an extender based on skim milk and only those samples with minimum 30% motility and 50x106 spermatozoa/ml were cryopreserved. The MMP evaluation was carried out before and after the cryopreservation process. Each sample was incubated for 10 minutes at 38 °C with MitoTracker Deep Red (100 nM) to determine the percentage of high MMP by imaging flow cytometry. The effect of cryopreservation on the percentage of spermatozoa with high MMP was evaluated by a paired t-student test and the percentage of motility and sperm with high MMP were correlated. A 49.82 ± 12.41 and 34.97 ± 9.96% of high MMP were obtained in samples before and after the cryopreservation process (p<0.05). A positive correlation was found (r = 0.62, p<0.0001) between motility and PMM. It is concluded that MMP is significantly reduced after the cryopreservation process, a parameter related to sperm motility.El objetivo de este estudio fue demostrar, mediante la citometría de flujo, que el porcentaje de espermatozoides de alpaca con alto potencial de membrana mitocondrial (PMM) se reduce significativamente luego del proceso de criopreservación. Se trabajó con 41 testículos de alpacas obtenidos del Camal Municipal de Ninacaca, Pasco, Perú. Se recuperaron los espermatozoides de la cola de los epidídimos con un dilutor en base a leche descremada y se congelaron solo aquellas muestras con mínimos de 30% de motilidad y 50x106 espermatozoides/ml. La evaluación del PMM se realizó antes y después del proceso de criopreservación. Cada muestra se incubó durante 10 minutos a 38 °C con MitoTracker Deep Red (100 nM) para determinar el porcentaje de alto PMM, mediante citometría de flujo con imágenes. El efecto de la criopreservación en el porcentaje de espermatozoides con alto PMM fue evaluado mediante la prueba de T-student pareada. Así mismo, se correlacionaron los porcentajes de motilidad y espermatozoides con alto PMM. Se obtuvo un 49.82 ± 12.41 y de 34.97 ± 9.96% de alto PMM en muestras antes y después del proceso de criopreservación (p<0.05). Se encontró una correlación positiva (r = 0.62; p<0.0001) entre motilidad y PMM. Se concluye que el PMM se reduce significativamente luego del proceso de criopreservación, parámetro relacionado a la motilidad espermática