EVALUACIÓN in vitro DE LA RESPUESTA LEUCOCITARIA DE ALPACAS (Vicugna pacos) EN PRESENCIA DE ANTÍGENOS CLOSTRIDIALES

The aim of this study was to evaluate the expression of proinflammatory cytokines of alpaca circulating leukocytes when confronting total extract of Clostridum perfringens (structural components and toxins). Whole blood was collected from the jugular vein of 5 female and 5 male adult alpacas. The leukocytes were separated using ammonium chloride to lyse erythrocytes followed by centrifugation and then cultured at a concentration of 500 000 cells/ml of MEM (Minimal Essential Medium) in culture plates of 12 wells. Simultaneously were challenged with total extract of C. perfringens grown in thioglycolate broth at concentrations of 400, 80, 16, 0.8 and 0.2 μg/ml and then quantifying by RT-PCR the expression of cytokines TNF∝, IL-1∝, IL-6 and IL-1ß at 1, 12 and 24 h of exposure. The results showed that low doses of clostridial extracts (0.2 to 0.8 mg/ml) are capable of inducing expression of TNF∝, IL-1∝ and IL-1ß at 1, 12 and 24 h of incubation, whereas higher doses do not exceed the expression of cytokines in unstimulated (control) leukocytes. There was no significant production of IL-6 up to 24 h after exposure to whole extract of C. perfringens. These results indicate that C. perfringens and its toxins at low doses induce activation of circulatory leukocyte in alpacas producing proinflammatory cytokine secretion.El objetivo del presente estudio fue evaluar la expresión de citoquinas proinflamatorias de leucocitos circulantes de alpaca al enfrentarlos a extracto total de Clostidium perfringens (componentes estructurales y toxinas). Se colectó sangre entera de la vena yugular de 5 alpacas hembras y 5 alpacas machos adultos. Los leucocitos fueron separados utilizando cloruro de amonio para lisar los eritrocitos, seguido de centrifugación y luego cultivados a una concentración de 500 000 leucocitos/ml de medio MEM (Medio Mínimo Esencial) en placas de cultivo de 12 pocillos. Simultáneamente, fueron enfrentados a extracto total de C. perfringens cultivados en caldo tioglicolato a concentraciones de 400, 80, 16, 0.8 y 0.2 μg/ml, para luego cuantificar, mediante la RTPCR, la expresión de las citoquinas TNF∝, IL-1∝, IL-1ß e IL-6 a 1, 12 y 24 h de exposición. Los resultados demostraron que dosis bajas de extractos clostridiales (0.2 a 0.8 μg/ml) son capaces de inducir expresiones de TNF∝, IL-1∝, e IL-1ß a 1, 12 y 24 h de incubación, a diferencia de dosis altas donde no sobrepasan la expresión de las citoquinas en leucocitos no estimulados (control). No se evidencia producción considerable de IL-6 hasta las 24 h post exposición a extracto completo de C. perfringens. Los resultados indican que el C. perfringens y sus toxinas a dosis bajas inducen la activación de los leucocitos circulantes de alpacas produciendo la secreción de citoquinas proinflamatorias