GENOTIPICACIÓN, EVALUACIÓN TOXIGÉNICA in vitro Y SENSIBILIDAD A ANTIBIÓTICOS DE CEPAS DE Escherichia coli AISLADAS DE CASOS DIARREICOS Y FATALES EN ALPACAS NEONATAS.

Clinical rectal diarrheic swabs (n=27) and pathological intestinal contents (n=24) from 51 alpacas between 1 to 7 weeks of age were used to isolate and genotype Escherichia coli, and to test for antimicrobial sensibility. All the E. coli isolates, confirmed by the API system, were genotyped by Multiplex PCR to determine the presence of virulence genes: stx1 and stx2 (shigatoxin 1 and 2), eae (intimin), bfp (Bundle-Forming Pili), lt (heat-labile toxin), sta and stb (heat-stable toxin A and B), in enterohemorrhagic (EHEC), enteropathogenic (EPEC) or enterotoxigenic (ETEC) E. coli strains. Positive stx1 and stx2 strains were tested on Vero cells for verocytotoxicity, and all isolates were tested for antimicrobial sensibility to the eight most frequent used antibiotics in Andean livestock. Microbiological and molecular analysis revealed the presence of pathogenic E. coli strains in 19/27 (70.4%) of the clinical diarrhea cases and 11/24 (45.8%) of the pathological intestinal content samples. In crias suffering from diarrhea, 94.7% (18/19) of the pathogenic isolates were EPEC strains while the remaining was stx2 EHEC with a low expression of verocytoxic activity (1:16). Eleven of the 18 EPEC were positive for both eae and bfp, while the remaining seven were eae positive only. Six of the 11 (54.5%) isolates from intestinal contents were EPEC eae positive only, while the remaining five (45.5%) were EHEC isolates. Three of the 5 EHEC isolates tested positive to stx1 with two expressing high verocytotoxicity, while the fourth tested positive for stx2 with similar high expression of verocytotoxicity, and the fifth was positive for both stx1 and stx2 genes but could not be evaluated the verocytotoxicity. Eighty percent of the pathogenic and non-pathogenic E. coli strains showed resistance to neomycin, and 25% to oxytetracycline. These results indicate that alpacas harbor potentially pathogenic E. coli strains that might cause clinical and fatal intestinal disorders in young animals.Se analizaron 27 hisopos diarreicos rectales y 24 contenidos patológicos del intestino de 51 alpacas de 1 a 7 semanas de edad para aislar y genotificar Escherichia coli, y caracterizar su sensibilidad antimicrobiana. Los aislamientos de E. coli fueron genotipificados por PCR múltiple para detectar genes de virulencia: stx1 y stx2 (shigatoxina 1 y 2), eae (intimina) y bfp (Bundle-Forming Pili), lt (toxina termolábil), sta y stb (toxina termoestable A y B), presentes en E. coli enterohemorrágica (EHEC), enteropatógena (EPEC) y enterotoxigénica (ETEC). Paralelamente, cepas positivas a stx1 o stx2 fueron analizadas en células Vero para detectar efectos verocitotóxicos. Posteriormente, todas las cepas aisladas fueron evaluadas para determinar su sensibilidad antimicrobiana a ocho antibióticos frecuentemente utilizados en ganaderías alpaqueras altoandinas. Los análisis microbiológicos y moleculares determinaron aislamientos de E. coli potencialmente patógenas en 19/27 (70.4%) de los hisopados clínicos y en 11/24 (45.8%) de los contenidos analizados. En crías padeciendo diarreas clínicas, se identificaron 18/19 (94.7%) cepas EPEC y la restante EHEC positiva al gen stx2 de baja actividad verocitotóxica (1:16). Once de las cepas EPEC contenían ambos genes eae y bfp y las siete restantes solamente el gen eae. De las crías muertas con antecedentes diarreicos, en 6/11 (54.5%) se aislaron cepas EPEC positivos al gen eae, mientras que las cinco restantes (45.5%) fueron EHEC. Tres de las 5 EHEC tenían el gen stx1 (dos con alta actividad verocitotóxica), la cuarta presentó el gen stx2 expresando alta actividad verocitotóxica, pero en el quinto aislado, positivo a ambos genes stx1 y stx2, no pudo evaluarse la actividad verocitotóxica. El 80% del total de E. coli (patogénicas y no patogénicas) aisladas en el estudio demostraron resistencia a la neomicina, y el 25% a la oxitetraciclina. Los resultados evidencian que las alpacas albergan cepas de E. coli potencialmente patógenas y probablemente causantes de patologías intestinales en crías de alpacas andinas